ГОСТ 33442—2015
Среду готовят из 10-кратной концентрированной тестовой среды (8.6); D.12. содержащей раствор микро
элементов (8.6); D.13. Используют свежий сульфид натрия нонагидрат (8.6); D.12, или промывают и высушивают
его перед использованием для гарантии того, что он обладает достаточной восстановительной способностью.
Если испытание проводят без использования перчаточного бокса (8.1, j), то концентрацию сульфида натрия в
основном растворе следует увеличить до 2 г/л (в отличие от 1r/л). Также сульфид натрия добавляют из соответ
ствующего основного раствора через крышку закрытых тестовых сосудов, поскольку эта процедура будет приво
дить к снижению риска окисления, с получением конечной концентрации 0.2 r/л. В альтернативном случае ис
пользуют цитрат титана (III). Его добавляют через крышку закрытых тестовых сосудов с получением концентра
ции в пределах от 0.8 до 1.0 ммоль/л. Цитрат титана (III) является высокоэффективным и низкотоксичным вос
становителем. который готовят следующим образом: растворяют 2.94 г цитрата натрия дигидрата в 50 мл бес
кислородной воды для разведения (8.3) (что дает раствор с концентрацией 200 ммоль/л) и добавляют 5 мл рас
твора хлорида титана (III) (15 г/100 л воды для разведения). Раствор нейтрализуют до pH (7±0,5) карбонатом
натрия и разливают в соответствующие бутыли в потоке газообразного азота. Концентрация цитрата титана (III) в
данном основном растворе составляет 164 ммоль/л. Тестовую среду используют сразу же или хранят при 4 ’С не
более 1сут.
D.12 Ь) Десятикратную концентрированную тестовую среду готовят следующим образом. Следующие ре
активы:
безводный дигидрофосфат калия КН;.РО« 2.7 г
динатрийфосфат Na^HPO* (или 11.2 гдодекагидрат) 4.4 г
хлорид аммония NH«CI 5.3 г
хлорид кальция дигидрат СаСЬ -2НгО0.75 г
хлорид магния гексагидрат MgCI* -6H-01.0 г
хлорид железа (II) тетрагидрат FeSO*-4НгО0.2 г
резазурин (окислительно-восстановительный индикатор) 0.01 г
сульфид натрия нонадигидрат Na?S 9Н-0 1.0 г
(или цитрат титана (III)) конечная концентрация0.8 ммоль/л до 1,0ммоль/л
раствор микроэлементов (D.13) 10.0 мл
дрожжевой экстракт100 г
растворяют в воде для разведения (8.3) идоводят водойдля разведения до 1000 мл.
D.13 с) Раствор микроэлементов готовят следующим образом. Следующие реактивы:
хлорид марганца (II) тетрагидрат MnCk -4Н20
0.5 г
ортоборная кислота H3BOj0.05г
хлорид цинка ZnClj0.05 г
хлорид меди (II) CuCI20.03 г
молибдат натрия диплдрат Na^MoCX -2НгО0.01 г
хлорид кобальта гексагидрат CojCl.- -бК-О
1.0 г
хлорид никеля гексагидрат NiCb-6Н-00.1 г
селенит динатрия NasSeOa0.05 г
растворяют в воде для разведения (8.3) идоводят водойдля разведения до 1000 мл.
D.14 8.11 «Предварительное испытание»:
Предварительное испытание проводят в соответствии с 8.10.2. за исключением того, что концентрация су
хого вещества ила составляет одну сотую от приведенных, то есть 0.1. 0.2 и 0.4 r/л. Продолжительность инкуба
ции составляет не менее 7 сут.
П р и м е ч а н и е — 6 межлаборагормом испытании (5) объем свободного пространства является слишком большим и
составляет 75 % от общего объема. Свободный объем следует поддерживать в рекомендуемом диапазоне от 10 % до 40 %.
Соответствующий критерий, которым является объем образованного газа на уровне примерно 80 % ингибирования, следует
измерять с приемлемой точностью (например, от i5 % до
1
10 %1).
D.15 8.12. 8.13 «Добавление тестируемых веществ, инокулята и субстрата»:
Добавление проводят аналогично тому, как описано в данных пунктах, но раствор субстрата (8.6) заменя
ют тестовой средой и дрожжевым экстрактом (D.11). Также конечная концентрация сухого вещества ила снижа
ется с 2—4 до (0.2±0,05) r/л (D.9). Два примера добавления компонентов в тестовую смесь, приведенные в таб
лице D.1. которая заменяет таблицу в 8.13.2.
D.16 8.15 «Инкубация сосудов»:
Вследствие ожидаемого низкого образования газа инкубацию проводят в течение не менее 7 сут.
D.17 8.16.1 — «измерение давления»:
Для измерения давления в свободном пространстве сосудов используют методику, аналогичную методи
ке. описанной в 8.16.1. Если определяют общие количества углекислого газа и метана, то pH жидкой фазы сни
жают примерно до pH 2 добавлением фосфорной кислоты в каждый соответствующий сосуд и измеряют давле
ние через 30 мин встряхивания при температуре испытания. Более подробная информация о качестве инокулята
может быть получена путем измерения давления в каждом сосуде до и после подкисления. Например, когда ско
рость образования углекислого газа значительно выше, чем метана, то чувствительность ферментативных бак
терий может измениться и/или метаногенные бактерии будут преимущественно подвергаться воздействию те
стируемого вещества.
14