ГОСТ 33442—2015
шока при переносе в термостат с поддержанием температуры на уровне (35±2) °С. При открытии бу
тылей следует соблюдать осторожность, поскольку происходит сброс избыточного давления газа.
Бутыли открывают осторожным ослаблением уплотнителя или с помощью трехстороннего клапана
для сброса давления (8.1, е). Предпочтительно использовать ил в течение нескольких часов после
сбора или хранить его при (35i2) “С в свободном пространстве азота не более 3 сут. В этом случае
происходит небольшая потеря активности.
8.4.2Активный ил выделяет горючие газы, представляющие пожаро- и взрывоопасность: он
также продуцирует потенциально патогенные микроорганизмы, поэтому при обращении с илом сле
дует предпринять соответствующие меры предосторожности. В целях безопасности не следует ис
пользовать стеклянные бутыли для сбора ила.
8.5 Инокулят
Непосредственно перед использованием ил осторожно перемешивают и просеивают через сито
с размером пор 1 мм2 (8.1, f ) в подходящую бутыль (8.1, д), через свободное пространство которой
пропускают азот. Отбирают пробу инокулята для определения содержания общего сухого вещества
[13]. Как правило, ил используют без разведения. Концентрация сухого вещества обычно составляет
от 2 % до 4 %, мас./об. Проверяют значение pH ила и. если требуется, доводят до (7«0,5).
8.6 Тестовый субстрат
Растворяют 10 г питательного бульона (например. Oxoid). Ю г дрожжевого экстракта и Ю г
D-глюкозы в деионизированной воде и доводят объем раствора деионизированной водой до 100 мл.
Раствор стерилизуют фильтрованием через мембранный фильтр 0,2 мкм (8.1, h) и сразу же исполь
зуют или хранят при 4 °С не более одних суток.
8.7 Тестируемое вещество
8.7.1 Готовят отдельный основной раствор каждого водорастворимого тестируемого вещества с
содержанием, например 10 г/л вещества, в бескислородной воде для разведения (8.3). Используют
соответствующие объемы данных основных растворов для приготовления тестовых смесей, содер
жащих градуированные концентрации. Альтернативно готовят серии разведений каждого основного
раствора таким образом, чтобы объем, добавленный в тестовые сосуды, был одинаковым для каждой
требуемой конечной концентрации. Если необходимо, то pH основных растворов доводят до (7±0,5).
8.7.2 Практические указания для веществ, которые недостаточно растворимы в воде, представ
лены в [12]. При необходимости использования органического растворителя следует избегать таких
растворителей, как хлороформ и четыреххлористый углерод, которые сильно ингибируют образова
ние метана. Готовят раствор соответствующей концентрации нерастворимого в воде вещества в под
ходящем летучем растворителе, например ацетоне, диэтиловом эфире. Вносят необходимые объе
мы растворителя в пустые тестовые сосуды (8.1, Ь) и выпаривают растворитель перед добавлением
ила. Для других методов обработки используют [12], но следует учитывать, что любые поверхностно-
активные вещества, используемые для получения эмульсии, могут ингибировать образование газа в
анаэробных условиях. Если предполагается, что присутствие органических растворителей и эмульга
торов вызывает появление побочных веществ или явлений, то тестируемое вещество может быть
добавлено непосредственно в тестовую смесь в виде порошка или жидкости. Летучие вещества и
не растворимые в воде жидкие тестируемые вещества можно вносить с помощью микрошприца в
тесто вые сосуды, содержащие инокулят (8.1, i).
8.7.3 В сосуды добавляют тестируемые вещества с получением серий концентраций, образую
щих геометрическую прогрессию, например 500. 250. 125, 62.5. 31,2 и 15.6 мг/л. Если диапазон ток
сичности для родственных веществ не известен, то вначале проводят предварительное
испытание для установления соответствующих пределов токсичности с концентрациями 1000. 100 и
10 мг/л.
8.8 Стандартное вещество
Готовят водный раствор 3,5-дихлорфенола (10 r/л) при постепенном добавлении минимального
количества 5 моль/л раствора гидроксида натрия к твердому веществу, со встряхиванием до раство
рения. Затем добавляют бескислородную воду для разведения (8.3) до требуемого объема; обработ ка
ультразвуком может способствовать растворению. Возможно использование других стандартных
веществ, если обеспечивается средний диапазон значений ЕСИ. не менее чем в трех испытаниях с
различным инокулятом (различные источники или разное время сбора).
5