ГОСТР ИСО 27911—2015
го набора параметров эксперимента будет зависеть от оператора. Следовательно, настоящий стандарт
не устанавливает особых значений параметров эксперимента при работе на БСОМ, но операторы могут
выбрать подходящие параметры эксперимента для оптимизации построения изображения на БСОМ на
свое усмотрение, включая поляризацию подводимого света, ширину зазора между зондом и образцом,
любыеэлектронные настройки, выбор зонда БСОМ. типа фотодетектораи др. Приведенная в 5.4 инфор
мация может помочь в выборе оптимальных настроек БСОМ. Кроме того, размер одного пикселя изо
бражениядолжен быть менее Vsожидаемого латеральногоразрешения, т. о. как минимум пять пикселей
должны находиться в диапазоне латерального разрешения [15].
6.4 Сбор данных и анализ
Для измерения используется БСОМ-изображение одиночной наночастицы, полученное с по
мощью записи флуоресценции стоксова сдвига, представляющейсобой однуяркую точку. ШПВ измеря
ют по единичному профилю или по среднему нескольких профилей.
a) Яркая точка должна быть изолирована — не перекрыта соседними точками.
b
) Наблюдаемая яркая точка предпочтительно должна быть круглой формы. Если точка не круг
лая — анализ следует проводить вдоль самого длинного направления.
В некоторых препаратах, где может иногда появляться агломерация частиц, анализируют две или
более частицы. Возможные большие или асимметричные точки могут быть проигнорированы.
Для измерений латерального разрешения важно использовать единичные КТ или очень малые
кластеры КТ. По этой причине используемыедля измерений КТдолжны быть подтверждены как единич
ные КТ или какдостаточно малый кластер, посредством наблюдения за процессом мерцания или одно
ступенчатым фотообесцвечиванием [17].
c) Полная длина линии профиля должна быть не менее пяти ожидаемых разрешений [15].
d) Соотношение «сигнал-шум» профиля, использующееся для измерений латерального разре
шения. должно быть выше, чем 5 :1. Соотношение «сигнал-шум» — это соотношение между централь
ным пиком высоты возле базовой линии профиля имаксимальным значением «пик-к-пику» поперечного
профиля, используемогодля оценки латерального разрешения. Для тогочтобы увеличитьсоотношение
«сигнал-шум», несколько профилей может быть усреднено в один профиль. Подразумеваются два пути
для усреднения множественных профилей, полученных из одиночного точечного профиля:
1) Усреднение количества независимых профилей: множественные профили, которые пересека
ют центр одиночной точки, произвольно выбирают и усредняют для получения единичного профиля.
2) Полосное усреднение: прямоугольную область, состоящую из многочисленных смежных ли
ний, выбирают над точкой, фигурирующей в качестве одиночного флуоресцентного объекта. Средний
профиль получается из линий, составляющих прямоугольную область.
КТ могут мерцать. Это ведет к случайным колебаниям в интенсивности сканирующихлиний вдоль
наиболее быстрого сканируемого направления. Необходимо убедиться в том. что достаточно данных
было записано для обеспечения уверенности получения адекватного соотношения «сигнал-шум».
Схематичная диаграмма для каждого метода представлена на рисунке 2.
6
Xпространственное расстояние. У — интенсивность, а — процесс усреднения
Рисунок 2 — Методы получения множественных профилей от одной яркой точки и их усреднение