ГОСТ 32296—2013
3 Принцип тестового метода
Группе животных одного пола, используя пошаговую процедуру, дают фиксированные дозы 5,
50. 300 и 2000 мг/кг {в особых случаях можно рассматривать дополнительную фиксированную дозу
5000 мг/кг). Начальная доза подбирается на основе прицельного исследования, так как доза
предполагает воспроизведение некоторых признаков токсичности, не причиняя сильных токсических
действий или летального исхода. Клинические симптомы и состояния, связанные с
болью, страданием и неминуемой смертью, подробно рассмотрены в отдельном разделе. Затем
группам животных могут вводиться более высокие либо низкие дозы, это зависит от наличия или
отсутствия признаков токсичности, или летального исхода. Процедура продолжается до тех пор.
пока доза не приведет к выраженной токсичности или пока не будет зафиксирован один случай
смерти, а также до тех пор, пока не будет наблюдаться отсутствие реакции при введении
наибольшей дозы или пока не наступит смерть при наименьшей дозе.
4 Описание тестового метода
4.1 Животные
4.1.1 Выбор вида
Наиболее предпочтительным видом грызунов является крыса, вместе с тем могут
использоваться и другие виды грызунов. В основном используются женские особи, так как они
являются более чувствительными к воздействию токсикантов [8. 11). Однако если токсикологические и
токсикокинетические данные для структурно родственных веществ показывают, что мужские особи
являются более чувствительными, следует использовать животных данного пола. Проведение
испытания с использованием мужских особей должно быть научно обосновано.
В эксперименте должны быть использованы здоровые молодые половозрелые особи обычно
используемых лабораторных линий. Женские особи не должны быть беременными или рожавшими.
Каждое животное на момент начала эксперимента должно быть в возрасте от 8 до 12 недель, а его
масса должна составлять ± 20 % от средней массы ранее исследуемых животных.
4.1.2 Условия содержания и кормления
Температура в лабораторной комнате должна составлять (22 ±3) С. Относительная влажность
должна быть как минимум 30% и не превышать 70 %, за исключением времени уборки комнаты;
оптимальное значение от 50 % до 60 %. Освещение должно быть искусственным в
последовательности 12 часов - свет. 12 часов - темнота. При кормлении может быть использована
обычная лабораторная диета с неограниченным количеством питьевой воды. Животных можно
содержать группами в клетках в зависимости от дозы, однако количество животных в клетке не
должно препятствовать наблюдению за каждым из них.
4.1.3 Подготовка
Животные должны быть отделены методом сплошной выборки, помечены и содержаться в
клетках не менее пяти дней до начала введения тестируемого вещества, что позволит им привыкнуть к
лабораторным условиям.
4.2 Процедура испытания
4.2.1 Приготовление доз
Как правило, изучаемое вещество вводится фиксированными объемами в диапазоне
испытуемых доз путем изменения концентрации доз. Если изучаемые продукты в жидком состоянии, то
целесообразно их использование для тестирования без разбавления, это может быть важно для
последующей оценки риска использования вещества. Максимальный разовый объем жидкости
зависит от размера подопытного животного. Вводимый грызунам объем не должен превышать 1
мл/100 г массы тела: между тем. в случаях с водными растворами объем дозы может составить 2
мл/100 г массы тела. В любом случае, максимальный объем вводимой дозы не должен быть
превышен. Рекомендуется использовать водные растворы/суспензии/эмульсии химических веществ,
для продуктов, нерастворимых в воде и в других растворителях, отдавая предпочтение
растворам/суспензиям/эмульсиямнамасляной
использования разбавителя (растворителя), не
основе (растительные масла). В случае
являющегося водой, его токсикологические
характеристики должны быть известны. Дозы должны быть приготовлены незадолго до введения с
учетом стабильности изучаемого препарата в период исследования.
4.2.2 Введение дозы
Испытываемый препарат вводится разовой дозой через зонд: желудочную трубку или
интубационную канюлю. Если в исключительных случаях введение разовой дозы невозможно, доза
может быть введена частями в период, не превышающий 24 ч.
Перед введением дозы животных необходимо ограничить в пище (т.е. крыс не кормить с вечера
2