ГОСТ 23453—2014
8.4.1 Приготовление мазка
Перед приготовлением мазка предметное стекло необходимо обезжирить и простерилизовать.
Для этого предметное стекло погружают в 95 %-ный раствор этанола и стерилизуют пламенем, после
чего охлаждают.
Используя микрошприц, отбирают 0.01 см3анализируемой пробы (при необходимости разбав
ленной). Микрошприц промывают анализируемой пробой. При необходимости тщательно и аккуратно
очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала с анализируемой пробой.
Смесь помещают на чистое предметное стекло площадью 1 см2. Используя иглу, равномерно
распределяют анализируемую пробу на всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы
площадь, прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсушивают
при комнатной температуре до состояния полной сухости.
Высушенный на предметном стекле мазок погружают в окрашивающий раствор метилового си
него и выдерживают в нем в течение 15-30 мин. Высушивают мазок при комнатной температуре.
Затем осторожно смывают излишки красителя в стакане с водопроводной водой. Высушивают
вновь и хранят в условиях защиты от пыли.
Срок хранения предметных стекол с мазками - не более 12 мес.
8.4.2 Подсчет соматических клеток
8.4.2.1 Общие положения
Используя микроскоп, подсчитывают соматические клетки в полученном мазке по 8.4.1 в полях
микроскопа, целиком заполненных мазком молока. Выбирают наилучшее увеличение (от 500* до
1000
‘ ).
Подсчету подлежат соматические клетки, к числу которых относятся: макрофаги (размер клеток
8-3 0 мкм). полиморфоядерные нейтрофилы (размер клеток 10-14 мкм). лимфоциты (размер клеток
5 - 1 0 мкм). лейкоциты (размер клеток 5 - 1 0 мкм) и эпителиальные клетки (размер клеток 10-14
мкм). Количество соматических клеток подсчитывается в целом, поэтому нет необходимости диффе
ренцировать их между собой.
П р и м е ч а н и я
1Лаборант должен уметь отличать соматические клетки от бактериальных, а также клеток дрожжей, плес
невых грибов и от жировых шариков.
2 Под микроскопом бактериальные клетки, не зависимо от формы, имеют значительно меньший размера,
чем соматические. Их размер колеблется от 0.3 до 4 - 5 мкм.
3 Дрожжи имеют клетки круглой, овальной или продолговатой формы, часто почкующиеся, с выраженным яд
ром или без него, зерненные или нет. размером 2.5- 10 * 2.5 - 30 мкм. Соматические клетки труднее всего диффе
ренцировать от клетох дрожжей, однако, они в среднем более крупные и в препаратах имеют неровный и менее
прокрашенный край.
4 Споры плесневых грибов размером с бактериальную клетку и имеют круглую, овальную или яйцевидную
форму. Гифы (вегетативные тела) обычно крупные 5-50 мкм. однако имеют характерную палочковидную форму с
перегородками или без них и хорошо отличаются от соматических клеток.
5 Жировые шарика имеют окрашенные контуры и слабую окраску внутри, крупных размеров и создают
фон. на котором просматриваются соматические и бактериальные клетки.
Не следует подсчитывать клетки с размером менее 8 мкм. Фрагменты клеток подсчитывают как
одну клетку, если ядра четко не разделены.
8.4.2.2 Подсчет в последовательных полях микроскопа
Подсчитывают соматические клетки в последовательных полях, в вертикальных полосах на
равномерно размещенных полях.
Подсчет начинают приблизительно на расстоянии dL= 0.5 мм от левой стороны.
Помещают нижний (верхний) край окружности поля микроскопа к внутренней нижней (верхней)
границе мазка.
После подсчета первого поля объектив передвигают на установленное расстояние <У„ вверх или
вниз до следующей градации и подсчитывают новое поле. Расстояние d„ = 1 мм считается пригод
ным.
Так повторяют вплоть до достижения противоположной стороны полосы.
Выбирают один из двух приведенных вариантов:
- последнее поле не подлежит подсчету:
- подсчет проводится после передвижения объектива до полного исчезновения границы мазка с
поля, если появляется верхняя или нижняя граница мазка и она заполняет менее половины поверх
ности поля.
Затем объектив передвигают вправо на расстояние d* = 1.5 мм или d. = 2 мм в зависимости от не
обходимого числа полей и начинают работать с новой полосой в противоположном направлении.
8