ГОСТ ISO 4052—2013
Переносят в хроматографическую колонку (см. 5.1) диаметром 17 мм. в нижнюю часть которой
помешен шарик из стекловаты. 3 г диатомита (см. 4.3) и 3 см3раствора серной кислоты (см. 4.1) осто
рожно перемешивают и утрамбовывают в колонку, как указано в 7.4.1.1 для слоя А в колонке I. Поме
щают шарик из стекловаты поверх этого слоя.
П р и м е ч а н и е - Набивочный материал для колонки можно приготовить в большом количестве зара
нее и хранить его в закрытых контейнерах. Для каждой колонки с кислой средой требуется материал массой
6.36 г.
7.4.2 Хроматографический анализ
Устанавливают колонки одну на другую таким образом, чтобы элюат из колонки I мог стекать
непосредственно в колонку II. Пропускают 150 см3 диэтилового эфира (см. 4.5) через две колонки. Ре
гулируют клапан колонки II так. чтобы некоторое количество жидкости оставалось над слоем.
Снимают колонку I. Пропускают 50 см диэтилового эфира (см. 4.5) через колонку II, используя
первоначальную порцию, чтобы промыть конец колонки I. и пропуская эту порцию в колонку II. Выпус
кают элюат из колонки II.
П р и м е ч а н и е - Используемый диэтиловый эфир может быть восстановлен путем встряхивания его
с сульфатом железа (II).
Пропускают лоток воздуха с верхней к нижней части колонки II (например, используя воздухона-
гнетатель) до тех пор. пока диэтиловый эфир не перестанет вытекать из колонки, а в воздушном по
токе из клапана будет ощущаться лишь слабый запах диэтилового эфира (см. предупрехадение ниже).
Элюируют колонку II хлороформом в объеме от 45 до 50 см3 (см. 4.7). Собирают элюат в мерную кол бу
вместимостью 50 см3(см. 5.4.3). доводят хлороформом (см. 4.7) до метки и осторожно перемеши вают.
Скорость потока диэтилового эфира и хлороформа должна быть от 1.5 до 3.0 см3/мин. Если эта
скорость превышена, возможно, что произошло образование каналов, и следует повторить опреде
ление.
Предупреждение - Введение диэтилового спирта и хлороформа следует проводить в
хорошо проветриваемом вытяжном шкафу, чтобы предупредить вероятность вдыхания паров
растворителя и вероятность взрыва.
7.4.3 Спектроскопические измерения (см. рисунок 2)
7.4.3.1 Измерение испытуемого раствора
Стараясь избежать погрешностей при испарении хлороформа и используя кварцевые кюветы
(см. 5.3), измеряют оптическую плотность раствора кофеина в хлороформе (см. 7.4.2) относительно
хлороформа (см. 4.7) на длине волны, соответствующей максимуму поглощения (приблизительно 276
нм), и на длинах волн на 30 нм выше и ниже этой длины для проверки чистоты полученного кофеина.
Если максимальная оптическая плотность превышает предел прецизионного измерения ис
пользуемой аппаратуры, повторяют измерение на разбавленной аликвоте раствора кофеина в хло
роформе (см. 7.4.2). В этом случае учитывают разбавление при расчете. Соответственно следует
скорректировать коэффициенты в формулах (1) - (5). Если максимальная измеренная оптическая
плотность ниже 0.2, повторяют определение, используя пробу для анализа большей массы.
7.4.3.2 Приготовление и измерение контрольного раствора
Готовят контрольный раствор кофеина следующим образом.
С точностью до 0,1 мг взвешивают (100 ± 20) мг чистого безводного кофеина (см. 4.6). Поме
щают его в мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 5.4.3). растворяют в хлороформе и доводят
раствор до метки. С помощью пипетки (см. 5.4.4) переносят 5,0 см3 этого раствора в мерную колбу
вместимостью 50 см3(см. 5.4.3) идоводят хлороформом до метки.
Измеряют оптическую плотность этого раствора, как указано в 7.4.3.1. Скорректированное зна
чение оптической плотности контрольного раствора (см. 8.1.1 и рисунок 2) должно быть равно при
близительно 0,4.
7.4.4 Количество измерений
Проводят два определения на отдельных порциях пробы для анализа, отобранных из одной и
той же пробы для анализа.
7.5 Контрольный опыт
Проводят контрольный опыт на реактивах, используя описанную методику, но без пробы для
анализа.
4