ГОСТ ISO/TS 21872—2013
9.4.2 Переворачивают чашки Петри с посевами. Чашки с посевами на TCBS агар (9.4.1) поме
щают в термостат (6.1), установленный на 37 °С. Посевы на вторую селективную среду инкубируют,
следуя инструкции изготовителя.
9.4.3 После инкубирования посевов (9.4.1 и 9.4.2) в течение (24 ± 3) ч их просматривают на на
личие типичных колоний предположительно патогенных Vibrio spp., отмечают их расположение на
дне чашки Петри.
Существуют две основные морфологические характеристики для колоний Vibrio spp. на TCBS
агар:
- типичные колонии V. parahaemolyticus гладкие зеленые (сахарозоотрицательные), от 2 до 3 мм
в диаметре;
- типичные колонии V. cholerae гладкие, желтые (сахарозоположительные), от 2 до 3 мм в диа
метре.
Вторую селективную среду инкубируют при соответствующей температуре в течение соответст
вующего периода времени, затем проверяют на наличие колоний, которые в соответствии с их харак
теристиками могут быть отнесены к возможно выделенным V. parahaemolyticus и V. Cholera.
9.5 Подтверждение
9.5.1 Для идентификации Vibrio до вида могут быть использованы разнообразные коммерчески
доступные наборы для биохимической идентификации, обеспеченные базой данных или идентифи
кационными таблицами. Наборы инокулируются суспензией определяемых бактерий. Суспензии для
инокуляции готовятся в физиологическом растворе или жидкости для разбавления. Наборы для био
химической идентификации основаны на реакциях, полученных при использовании сред, аналогич ным
тем, которые описаны в настоящем стандарте. Данные наборы следует использовать в соответ ствии с
требованиями инструкций изготовителей.
П р и м е ч а н и е — Распознавание колоний Vibrio в значительной степени вопрос опыта, их внешний
вид может иногда различаться в зависимости не только от вида, а также от партии питательной среды.
9.5.2 Отбор колоний для подтверждения и приготовления чистых культур
Для подтверждения пересевают с каждой селективной среды (см. 9.4) по меньшей мере пять
колоний, которые считаются типичными для каждого потенциально патогенного вида Vibrio spp. (V.
parahaemolyticus. V. cholerae). Если на чашке менее пяти типичных колоний, то пересевают все эти
колонии.
П р и м е ч а н и е — Пищевые продукты, особенно морепродукты, могут содержать большое число бак
терий. включая непатогенные Vibrio spp., которые могут расти в процессе культивирования на селективных сре
дах. Пересев малого количества колоний может привести к потере потенциально патогенных видов.
Пересевают отобранные колонии на поверхность чашек с солевым питательным агаром или по
верхность скошенного солевого питательного агара (5.3) для получения изолированных колоний. По
севы инкубируют при температуре 37 °С в течение (24 ♦ 3) ч.
Для биохимического подтверждения используют чистые культуры.
9.5.3 Тесты для идентификации
9.5.3.1 Тест на оксидазу
Используя петлю из платиново-иридиевого провода или стеклянный стержень, отбирают часть
чистой культуры с солевого питательного агара (9.5.2) и проводят по поверхности фильтровальной
бумаги, увлажненной реактивом на оксидазу (5.4), или используют коммерческие диски или растворы,
следуя инструкциям изготовителя. Не допускается использовать никель-хромовую петлю для отбора
или металлическую проволоку. Тест считается положительным, если цвет меняется на розовато-
лиловый. фиолетовый или насыщенный фиолетовый в течение 10 с.
9.5.3.2 Микросколирование
Каждую чистую культуру, полученную по 9.4.2. тестируют в соответствии с а) и Ь) как указано
далее.
a) Готовят мазок для окраски по Граму. После окраски, используя микроскоп, проверяют морфо
логию и отношение к окраске по Г раму.
b
) Инокулируют пробирку с щелочной солевой пелтонной водой (ASPW) (5.1). Посев инкубируют
при 37 °С от 1 ч до 6 ч. Наносят каплю культуры на чистую поверхность предметного стекла, макры-
5