ГОСТ ISO/TS 21872—2013
Приложение В
(обязательное)
Состав и приготовление питательных сред и реактивов
В.1 Щелочная солевая пептонная вода (ASPW)
В.1.1 Состав:
пептон — 20.0 г;
натрия хлорид — 20,0
г;
вода — 1000
cmj
В.1.2 Приготовление
Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости. Если необходимо, регулируют pH так. чтобы
после стерилизации он составлял 8,6 ± 0.2 при 25 "С.
Разливают среду в пробирки или колбы подходящего обьема. чтобы получить порции, в количествах, тре
буемых для анализа (см. 9.1. 9.3.1). Стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 “С.
В.2 Тиосульфат, цитратный, желчный, сахарозный (TCBS) агар
В.2.1 Состав:
пептон — Ю.Оп
дрожжевой экстракт — 5.0 г.
цитрат натрия — 10.0 г;
тиосульфат натрия — 10,0 г;
цитрат железа (iti)— 1.0 г:
хлорид натрия — 10.0 г;
сухая бычья желчь — 8.0 г;
сахароза — 20.0 г;
бромтимоловый голубой — 0.04 г;
тимоловый голубой — 0,04 г;
агар — 8.0-18.0 г";
вода — 1000 см3.
В.2.2 Приготовление
Растворяют компоненты или дегидратированную основу в воде доведением до кипения. Если необходимо,
регулируют pH так. чтобы он составлял 8.6 ± 0.2 при 25 "С. Среду не автоклавируют.
В.2.3 Приготовление чашек с агаром
Разливают в чашки Петри по 15 — 20 см3свежеприготовленной среды, охлажденной приблизительно до
50 °С. и оставляют для застывания.
Непосредственно перед использованием тщательно подсушивают поверхность агаровой среды в чашках
Петри (предпочтитепьнее после снятия крышек и переворачивания чашек).
В.2.4 Контроль среды
Для количественной оценки эффективности роста для каждой партии TCBS агара используют солевой пи
тательный агар (SNA) как сравнительную среду и следующие штаммы:
- V. parahaemolyticus: NCTC 10885;
- V. furnissii: NCTC 11218;
- Escherichia coli: ATCC 25922. 8739 или 11775.
Эффективность роста рассчитывают по формуле
(/V,o«/NSu
а
) - 100.
где
N
— количество выросших колоний.
Эффективность роста должна составлять как минимум 50 % для каждых видов Vibrio (организмы положи
тельного контроля) и менее 1 % для Е. coli (организмы отрицательного контроля). Колонии V. parahaenroiyticus:
NCTC 10885 должны быть зелеными (сахароэоогрицательными), а колонии V. furnissii: NCTC 11218 должны быть
желтыми (сахарозоположительными).
В зависимости от желирующих свойств агара.
10