ГОСТ 32426—2013
они должны быть также выдержаны минимум три недели. Об источнике растительного материала, так
же как о виде растений и клона (если известно), используемых для эксперимента, нужно всегда
сообщать в отчете.
4.2.2 Следует использовать монокультуры, которые явно свободны от загрязнения другими орга
низмами. такими, как водоросли и простейшие. Здоровые растения L. minorбудут состоять из колоний,
содержащих от двух до пяти зеленых пластинок, в то время как колонии L. gibba могут содержать до
семи пластинок.
4.2.3 Качество и однородность растений, используемых для теста, имеют существенное влия
ние на результат теста, и поэтому должны быть отобраны с особым вниманием. Следует использо
вать молодые, быстро растущие растения без видимых повреждений или обесцвечивания (хлороза).
Культуры хорошего качества имеют большое количество колоний, содержащих не менее двух плас
тинок. Большое количество колоний с одной пластинкой является признаком стресса, такого, как
не-достаток питательных веществ, и растительный материал таких культур не следует
использовать для тестирования.
4.3 Культура
4.3.1 Чтобы уменьшить частоту обслуживания культуры (например, когда не планируют тесты с
Lemna). культуру можно содержать под уменьшенным освещением при температуре 4 °С—10 °С. Дета ли
культивирования даны в приложении В. Очевидные признаки загрязнения водорослями или другими
организмами могут потребовать поверхностной стерилизации образца пластинки Lemna исмены среды
на свежую (см. приложение В). В этом случае необходимо отказаться от сохранения загрязненной
культуры.
4.3.2 По крайней мере за семь дней до тестирования культуру асептически пересаживают в све
жую среду и культивируют в течение 7—10 дней при условиях теста.
4.4 Тестовая среда
4.4.1 Рекомендуются различные среды для L. minora L. gibba. описанные ниже. Необходимо с
осторожностью использовать pH-буферы в тестовой среде (MOPS ((4-морфолино)пропан сульфокисло
та. CAS 1132-61-2) в средедля L. minora NaHC03в средедля L. gibba), если есть подозрение, что буфер
может реагировать с тестируемым веществом и оказать влияние на показатели токсичности. Среду (9)
Штейнберга (Steinberg) можно использовать, при соблюдении критериев достоверности.
4.4.2 Модификация среды шведского стандарта (SIS) для Lemna рекомендуется для культивиро
вания и тестирования L. minor. Состав этой среды дан в приложении С.
4.4.3 Среда роста 20Х—ААР, описанная в приложении С. рекомендуется для культивирования и
тестирования L. gibba.
4.4.4 Среда Штейнберга. описанная в приложении С. также подходит для L. minor, но может быть
также использована для L. gibba. если отвечает критериям достоверности.
4.5 Экспериментальный раствор
4.5.1 Экспериментальные растворы обычно готовят разбавлением маточного раствора. Маточ
ные растворы обычно готовят растворением тестируемого вещества в культивационной среде.
4.5.2 Самая высокая тестируемая концентрация испытуемого вещества недолжна превышать его
растворимость в воде при условиях тестирования. Нужно отметить, однако, что виды Lemna spp. плава ют
на поверхности и могут быть подвергнуты воздействию веществ, которые аккумулируются в водно-
воздушном пространстве (например, плохо растворимые в воде, гидрофобные или поверхностно-актив
ные вещества). В этом случае воздействие будет результатом других концентраций, отличных от тесто
вых и превышающих растворимость исследуемого вещества в воде.
Для плохо растворимых веществ может потребоваться подготовить концентрированный маточный
раствор или дисперсию вещества, используя органический растворитель или диспергатор для облегче
ниядобавления точных количествтестируемого вещества к испытательной среде иее более легкойдис
персии и растворения. Использования этих веществ необходимо по возможности избегать.
Растворители и диспергаторы не должны обладать фитотоксичностью. Например, ацетон и диметил-
формамид являются примерами растворителей, которые не вызывают фитотоксичность при концентра
циях до 100 мкл/л. Если используют растворитель или диспергатор, их конечная концентрация должна
быть сведена к минимуму и не превышать 100 мкл/л. Концентрация этих веществдолжна быть одинако
вой во всех тестах, и это должно быть указано в отчете об исследовании. Более подробное руководство по
использованию диспергаторов дано в [8].
4