ГОСТР ИСО 13496—2013
Декантируют прозрачный раствор в плоскодонную колбу (см. 6.3). В случае присутствия индиго-
кармина используют круглодонную колбу (см. 6.4).
В центрифужную пробирку, содержащую осадок, добавляют 5 см3 воды. Перемешивают и до
бавляют 10 см3 элюента (см. 5.11). Снова перемешивают и центрифугируют как описано выше.
Эту процедуру повторяют, пока все красители не экстрагируются из пробы, затем объединяют
все экстракты.
Смешанный экстракт упаривают на водяной бане до объема около 25 см3 для удаления метано
ла. В случае присутствия индигокармина используют круглодонную колбу (см. 6.4) и ротационный
испаритель (см. 6.6) при температуре35 °С.
Добавляют 25 см3 кипящей воды (см. предупреждения) и перемешивают.
9.4 Перенос красителей на полиамидный порошок
С помощью уксусной кислоты (см. 5.5) или раствора аммиака (см. 5.4) доводят pH до значения
от 4 до 5 ед. pH.
К теплому раствору (см. предупреждения) добавляют 1 г полиамидного порошка (см. 5.13).
Энергично встряхивают в течение 1 мин.
Дают возможность порошку сформировать осадок.
Проверяют, окрашен ли раствор. Если раствор окрашен, то добавляют еще немного полиамид
ного порошка и энергично встряхивают.
П р и м е ч а н и е - Некоторые натуральные красители (см. приложение В) не полностью адсорбиру
ются на полиамидном порошке, оставляя раствор окрашенным, даже если все синтетические красители были
полностью адсорбированы. Обычно по типу пробы можно заключить, присутствуют ли в ней такие натуральные
красители.
Встряхивают и переносят теплую суспензию в хроматографическую колонку (см. 6.7).
Промывают плоскодонную колбу тремя порциями по 10 см3 горячей воды (см. предупреждения),
добавляют каждый раз промывные воды в колонку. Промывают колонку другими тремя порциями по 10
см3горячей воды (см. предупреждения) и затем тремя порциями по 5 см3метанола (см. 5.3). Если
натуральные красители элюируются, то продолжают промывать колонку метанолом, пока он не обес
цветится.
9.5 Элюирование и концентрирование выделенных красителей
Помещают колбу (см. 6.4) под колонкой и элюируют красители из полиамидного порошка пор
циями по 5 см3элюента (см. 5.11) при объемной скорости потока элюента 2 см3/мин. пока полиамид не
станет бесцветным.
Выпаривают полученный элюат досуха с помощью испарителя (см. 6.6) при температуре не вы
ше 35 °С (см. предупреждения).
В зависимости от содержания и числа красителей, добавляют 1.0 или 2.0 см3элюента (см. 5.11)
и растворяют высушенный остаток. Помещают раствор красителей в пластиковую емкость (см. 6.8).
9.6 Разделение с помощью тонкослойной хроматографии
9.6.1 Пластинки со стандартными растворами
Готовят три стандартные пластинки для тонкослойной хроматографии со стандартными раство
рами (см. 5.16). Используя микропипетку (см. 6.10). наносят около 5 мм3каждого стандартного рас
твора (см. 5.16) отдельно на каждую пластинку в виде пятна (диаметр < 5 мм) на каждую пластинку (см.
6.9). Развитие хроматограмм на пластинках проводят отдельно в ненасыщенных камерах с каж дым из
элюентов для хроматографии (см. 5.17, 5.18 и 5.19). пока фронт растворителя не достигнет
расстояния около от 10 см до 12 см от стартовой линии. Вынимают пластинки из камеры и сушат на
воздухе в вытяжном шкафу. Пластинки хранят в темном месте. Пятна всех красителей, за исключе
нием индигокармина. являются устойчивыми в течение нескольких лет.
9.6.2 Пробы
На пластинку для тонкослойной хроматографии (см. 6.9) с помощью микропипетки (см. 6.10) на
носят едва видимое количество раствора пробы (см. 9.5). Сушат пластинку с помощью фена. В слу чае
присутствия индигокармина сушат на воздухе.
Развитие хроматограммы на пластинке проводят в ненасыщенной камере до высоты около от
10 см до 12 см, используя подходящий раствор для хроматографии (см. 5.16. 5.17 или 5.18), то есть
тот раствор, который обеспечивает наилучшее разделение красителей, обнаруженных в пробе
(см. раздел 1). В некоторых случаях для получения наилучшего разделения может потребоваться
приго товление второй пластинки с пробой и развитие хроматограммы с одним из двух других
элюентов.
Вынимают пластинку из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу.
Сравнивают пятна на пластине с пробой с пятнами на соответствующих пластинах со стандарт
ными растворами (см. 9.6.1).
4