ГОСТ 32148—2013
7.2.6Проводят регистрациюрезультатовПЦРвсоответствиисинструкцией киспользуемой модели
амплификатора по ГОСТ 31719 для проведения RT-ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
8 Детекция (обнаружение) продуктов амплификации
8.1 Детекцию продуктов амплификации фрагментов видоспецифичнойДНК методом электрофо
реза проводят по ГОСТ 31719*.
Регистрацию и документирование полученных результатов путем занесения в базу данных ком
пьютера осуществляют при помощи системы для документирования гелей по ГОСТ 31719 в соответ
ствии с прилагаемым к ней техническим описанием.
8.2 Детекцию продуктов амплификациифрагментов видоспецифичнойДНК птиц в режиме реаль
ного времени проводят по ГОСТ 31719**.
Результаты качественногоанализаотображаютсяс помощьюпрограммногообеспечения прибора
в виде кривых флюоресценции и в виде табличных данных, содержащих количество циклов log-фазы
(ГОСТ 31719), полученныхдля анализируемых проб, а также отрицательной (К-) и положительной (К*)
проб.
9 Обработка результатов анализа
9.1 ПЦР с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза
Оценку результатов анализа проводят визуально сравнением взаимного расположения на элек-
трофореграммаханализируемой пробы иконтрольныхпробполос, соответствующихвидоспецифично
му фрагменту ДНК птиц, полученному в реакции с положительным контролем К+.
Положительными, то есть содержащими видоспецифичный фрагмент ДНК. считаются пробы,
содержащиесветящиеся полосы на электрофореграммахнеменеечемдвух изтрех параллельныхпроб
ирасположенныенатаком же расстоянииотстарта, чтоиполоса, соответствующаяположительнойкон
трольной пробеК+. При этом наэлектрофореграмме отрицательнойконтрольной пробы К- соответству
ющая полоса должна отсутствовать.
Если светящаяся полоса видоспецифическогофрагментаДНК присутствует тольконаэлектрофо
реграммеодной параллельной пробы, а на двухдругих отсутствует, атакже в случае отсутствия полосы
фрагментаДНК наэлектрофореграммепробы К+ и/или присутствия полосы нафореграммопробы К-. то
результат считается сомнительным. В этом случае необходимо провести повторную амплификацию с
анализируемым экстрактом ДНК. Если удовлетворительный результатне будетдостигнут и в этом слу
чае. то необходимопровести повторныйанализ, начиная свыделенияДНК изновойпробы исследуемо
го яичного продукта.
9.2 RT-ПЦР с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени
Оценку результатованализа проводят визуально сравнением кривыхфлюоресценциидля анали
зируемых проб и контрольных проб К- и К+, а также по значениям циклов /од-фазы.
Положительными, то есть содержащими видоспецифичный фрагментДНК, считаются пробы, для
которых в процессе амплификации наблюдается увеличение интенсивности флуоресценции (кривая
флуоресценции имеет S-образную форму) и количество циклов /og-фазы имеет конечное значение
(не более40). При этомдолжны выполнятьсяследующиеусловия: для всехположительныхпроб К* дол
жно наблюдаться увеличение интенсивности флуоресценции и кривая флуоресценции должна иметь
S-образнуюформу; вконтрольныхотрицательныхпробахК- недолжнопроисходитьнакоплениепродук
тов ПЦР. поэтомуграфикфлуоресценциидля всехэтих пробдолжен иметь видпрямойлинии. При нару
шении хотя бы одного из этих условий необходимо провести повторную амплификацию с
анализируемым экстрактом ДНК. Если удовлетворительный результатне будетдостигнут и в этом слу
чае. то необходимо провести повторный анализ, начинаясвыделенияДНК изновойпробы исследуемо го
яичного продукта.
9.3 Оформление результатов анализа
При положительной детекции продуктов амплификации в протоколе испытаний указывают:
«Видоспецифичный фрагмент ДНК [вид птицы] — обнаружен».
8
* Детекцию данным методом проводят а случае анализа по 7.1.
** Детекцию данным методом проводят в случае анализа по 7.2.