ГОСТ 28086-2013
Содержимое трех ампул (флаконов) растворяют в дистиллированной воде для инъекций или
физиологическом растворе в количестве, равном количеству до лиофилиэации и объединяют. Из
смеси готовят разведение вируссодержащего материала таким образом, чтобы в прививном объеме
содержалось 10 прививных доз вакцины (4,0 lg ИДюсм3). Вакцину вводят четырем кроликам внутри
мышечно в область бедра по 1,0 см3и внутрикожно по0.25 см3в четыре точки в бесшерстный
участок кожи спины и боков, для чего выстригают шерстный покров на боках животных, перпендику
лярно позвоночнику. За животными ведут наблюдение в течение 28 сут.
6.7.3Обработка результатов
Вакцину считают безвредной, если в течение срока наблюдения все кролики остаются живы
ми и клинически здоровыми. В месте внутрикожного введения вакцины должны образоваться миксо-
мы. которые исчезают в течение срока наблюдения. В месте внутримышечного введения вакцины
должны отсутствовать локальные изменении. У одного из вакцинированных кроликов
допускается появление узелков на веках, ушах, конъюнктивита и ринита, которые исчезают к 28-м
суткам наблю дения.
6.8 Определение инфекционной активности вакцины
6.8.1 Определение инфекционной активности вакцины на кроликах (1д ИД шс*3)
6.8.1.1 Материалы и животные - по 6.7.1.
6.8.1.2 Проведение испытания
Готовят смешанную пробу вакцины по 6.7.2 и из смеси готовят десятикратные разведения
вакцины от 10’1до 10^ на стерильном физиологическом растворе.
Разведения вакцины (от 10’ до 10’2) вводят внутрикожно двум клинически здоровым, воспри
имчивым к миксоматозу, кроликам. Для этого выстригают шерстный покров на спине и боках живот
ных перпендикулярно позвоночнику в виде полос на расстоянии 2-3 см. Каждое разведение вакцины,
начиная от 10 , вводят в направлении от хвоста к голове внутрикожно в четыре точки полосы по 0.25
смэпо две инъекции с каждой стороны позвоночника.
Активность вируса определяют по наличию и размеру миксом, образующихся у кроликов на
шестые - десятые сутки на месте введения вакцины.
При визуальном определении учитывают миксомы размером 5 - 6 мм и крупнее.
6.8.1.3 Обработка результатов
Инфекционную активность для кроликов рассчитывают по методу Рида и Менча и выражают в
lg ИД ккмЭ- Для пересчета инфекционной активности на 1 см3 к полученному результату прибавляют
коэффициент 0,6 lg. Инфекционная активность должна быть не ниже 4.0 lg ИД М1см3.
6.8.2 Определение инфекционной активности вакцины в культуре клеток (1д ТЦД so*».3).
Определение инфекционной активности проводят в культуре клеток в пробирках или микро
методом в планшетах для культуры клеток.
6.8.2.1 Материалы и реактивы
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709
Груша резиновая.
Горелка газовая или спиртовая.
Бокс ламинарный.
Культура клеток почки кролика перевиваемая (RK-13) или первично трипсинизированная куль
тура клеток почки кролика возраста 2-5 сут.
Пипетки градуированные вместимостью 1-10 см3по ГОСТ 29230.
Пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 25336.
Пробки резиновые.
Микроскоп световой инвертированный.
Спирт этиловый ректификованный 96 поГОСТ 18300.
Среда питательная Игла МЕМ.
Сыворотка крови эмбрионов крупного рогатого скота.
Термостат с температурой нагрева (37,0 ± 0.5) °С.
С02- инкубатор
Планшеты с лунками.
Флаконы из трубки стеклянной для лекарственных средств.
Допускается применение других материалов и реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.
6.8.2.2 Проведение испытания в культуре клеток в пробирках
Содержимое трех ампул (флаконов) растворяют средой Игла МЕМ в количестве, равном ко
личеству до лиофилизации. Готовят десятикратные разведения вируссодержащего материала от 10’1
до 10’7на питательной среде Игла МЕМ с добавлением 1.0 %-ной сыворотки крови эмбрионов крупно
го рогатого скота, и вносят по 1.0 см3в пробирки с монослоем перевиваемой линии клеток почки кро-
6