ГОСТ ISO/TS 10272-2—2013
Отбираютчашки (9.2.2). содержащие менее 150 типичных или подозрительных колоний; эти коло
нии подсчитывают. Затем отбирают случайным образом пять таких колоний для субкультивирования
для проведения подтверждающих испытаний (9.4).
9.3.2Проводят штриховой посев каждой из отобранных колоний (9.3.1) на чашки с колумбийским
кровяным агаром (5.4) с целью содействия развитию изолированных колоний. Чашки инкубируют в
аэробных условиях при температуре 41.5 вС в точение 24—48 ч. Для исследования морфологии, под
вижности. аэробного роста притемпературе 25 °С, аэробного роста при температуре 41.5 °С иналичия
оксидазы используют чистые культуры.
9.4 Подтверждение вида Campylobacter
9.4.1 Исследование морфологии и подвижности
9.4.1.1 Суспендируютоднуколонию изчашкис колумбийским кровяным агаром (9.3.2)в 1см3жид
кой среды для бруцелл (5.5) и анализируют морфологию и подвижность с использованием микроскопа
(6.13).
9.4.1.2 Для последующих исследований сохраняют все культуры (9.3.2), в которых обнаружены
изогнутые бациллы с подвижностью спирального штопора (9.4.1.1).
9.4.2 Исследование аэробного роста при температуре 25 °С и41,5 °С
Изолированные колонии, указанные в 9.4.1.2. пересевают петлей (6.11) на поверхность обеих
чашекс колумбийским кровяным агаром (5.4).
Инкубируют одну чашку при температуре 25 °С в аэробных условиях (6.14) в течение 40—48 ч.
Инкубируют вторую чашку при температуре 41,5 °С в аэробных условиях втечение40—48ч.
Исследуютчашки на предмет видимого роста колоний Campylobacter.
9.4.3 Обнаружение оксидазы
Используя платиново-иридиевую петлю или стеклянную палочку (6.11). отбирают часть изолиро
ванной колонии из каждой отдельной чашки (9.4.1.2) и наносят на фильтровальную бумагу, смоченную
реактивом для обнаружения оксидазы (5.6). Появление лилового, сиреневого или темно-синего цвета в
течение 10 с свидетельствует о положительной реакции. Если используется имеющийся в продаже
набордля анализа оксидазы. необходимо следовать инструкциям изготовителя.
Результаты подтверждают, используя положительный и отрицательный контроль. Примерами
подходящих контрольных штаммов являются Pseudomonas aeruginosa NCTC 10662 (положительный
контроль) и Escherichia coli NCTC 9001 (отрицательный контроль).
9.4.4 Интерпретация
Campylobacter spp. дает результаты согласно таблице 1.
Т а б л и ц а 1 — Характеристики Campylobacter spp.
Наименование показателяХарактеристика
Морфология (9.4.1)
Малые искривленные бациллы
Подвижность (9.4.1)
Характерная
Аэробный рост при 25 *С (9.4.2)
-
Аэробный рост при 41.5 ‘С (9.4.2)
-
Оксидаза (9.4.3)
♦
10 Обработка результатов
10.1 Подсчет колоний Campylobacter
10.1.1 Если подтверждается по крайней мере 80 % отобранных колоний (9.4.4), за число
Campylobacter принимаютчисло, приведенное в подсчете в соответствиис 9.3.
10.1.2 Во всехостальных случаях рассчитывают числа Campylobacter, которые были получены в
соответствии с9.3 и подтверждены (9.4.4). Результатокругляютдо целого числа колоний.
10.2 Метод расчета
10.2.1 Общий случай — чашки, содержащие от 15 до 150 колоний презумптивных
Campylobacter
Рассчитываютчисло N Campylobacterсм3/г, присутствующих в испытуемой пробе каксредневзве
шенное значение наосноведвух последовательных разведений, используя уравнение:
6