ГОСТ 26075-2013
7.2.1.2 Приготовление отпечатков
Кусочки ткани, отобранные по 6.5, кладут на фильтровальную бумагу, сложенную в четыре -
шесть слоев. Мозг мелких животных разрезают поперек, захватывая все его отделы, и кладут его
пинцетом срезом вверх на фильтровальную бумагу, сложенную в четыре - шесть слоев. К поверхно
сти среза прикасаются предметным стеклом, слегка надавливая его до получения на стекле тонкого
отпечатка.
7.2.1.3 Приготовление мазков
Кусочек ткани из каждого отдела мозга (у мелких животных весь мозг целиком), отобранный
по 6.5, растирают в фарфоровой ступке пестиком до образования гомогенной массы, из которой де
лают мазки на предметных стеклах.
7.2.1.4 Для контроля делают мазки или отпечатки из мозга здоровых, не болевших бешенст
вом и не вакцинированных против бешенства, белых мышей, как описано в 7.3.1.2 и 7.3.1.3.
7.2.1.5 После приготовления мазки или отпечатки высушивают на воздухе в течение 20 - 30 мин,
фиксируют в охлажденном ацетоне при температуре 4 °С в течение 4 - 12 ч или при температуре минус 20
°С втечение 1ч, после чего извлекают из ацетона ивысушивают на воздухе втечение 10—15 мин.
7.2.2 Подготовка реактивов
ФАГ, АнГ и КФГ растворяют дистиллированной водой до указанного на этикетке ампулы пер
воначального объема. Срок хранения растворенных ФАГ, АнГ и КФГ при температуре (5 ± 2) °С - не
более двух недель.
Непосредственно для исследования необходимое количество растворенных ФАГ, АнГ и КФГ
разводят ФБР до рабочего разведения, указанного на этикетке ампулы. Рабочие разведения раство
ренных ФАГ, АнГ и КФГ используют вдень приготовления.
7.3 Проведение исследования
Предметные стекла с препаратами (мазками или отпечатками) по 7.2.1 помещают во влажную
камеру (чашку Петри или кювету с увлажненным дном). Затем на один из трех приготовленных пре
паратов наносят ФАГ в рабочем разведении равномерно на всю поверхность мазка или отпечатка при
помощи пипетки. На второй препарат наносят рабочее разведение КФГ. Закрывают камеру с препа
ратами, помещают в термостат при температуре(37 ± 1) °С и выдерживают в течение 30
мин. Параллельно окрашивают контрольные препараты. По окончании окрашиванияпрепараты
трехкратно промывают, погружая их каждый раз на 10 мин в сосуд с ФБР, ополаскивают
дистиллиро ванной водой и высушивают на воздухе в течение 20 - 30 мин.
На третий препарат наносят рабочее разведение АнГ, помещают в термостат при температу
ре (37 ± 1) °С и выдерживают в течение 30 мин. Затем препарат трехкратно промывают, погружая ка
ждый раз на 10 мин в сосуд с ФБР, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе
в течение 20 - 30 мин и окрашивают рабочим разведением ФАГ, как описано выше.
На окрашенные препараты наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматри
вают в люминесцентном микроскопе.
7.4 Обработка результатов
В окрашенных препаратах не пораженная вирусом бешенства мозговая ткань светится туск
лым, серовато-желтым цветом.
Антиген вируса бешенства выявляется в нейронах и вне клеток в виде ярких зеленых гранул
различной формы и величины - от едва заметных до имеющих размер в диаметре 15-20 мкм. Ино гда
отмечается большое количество мелких ярких зеленых частиц (размером до 1 мкм) округлой и
овальной формы.
Диагноз бешенство считается установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа в
исследуемом препарате обнаруживают типичные желтовато-зеленые гранулы. При этом в контроль
ных препаратах (в мазках или отпечатках из мозга здоровых не болевших бешенством белых мышей,
окрашенных ФАГ), а также в исследуемых препаратах, окрашенных КФГ и предварительно обрабо
танных АнГ иокрашенных ФАГ, подобных образований быть не должно.
О результатах исследования сообщают компетентным органам в соответствии с порядком,
действующим на территории государства, принявшего стандарт.
В случае отрицательного результата проводят исследования по 8 или 9.
8Метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной ней
робластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1)
8.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в выделении вируса бешенства в культуре клеток мышиной
нейробластомы CCL-131 или НГУК-1 с последующей его идентификацией методом флуоресцирую-
5