ГОСТ 26075-2013
- культуру клеток мышиной нейробластомы CCL-131 или невриномы Гассерова узла крысы -
НГУК-1;
- пенициллин;
- стрептомицин;
- среду Игла МЕМ с двойным набором аминокислот и витаминов (ДМЕМ), pH 7,2;
- раствор трипсина 0,25 %-ный;
- сыворотку эмбриональную крови крупного рогатого скота для культур клеток 10 %-ную;
- глютамин 3 %-ный;
- перекись водорода 3 %-ную по ГОСТ 177;
- набор препаратов для лабораторной диагностики бешенства животных методом ИФА;
- раствор серной кислоты молярной концентрации 2 моль/дм3по ГОСТ 4204;
- бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;
- штамп для приготовления лунок;
- мертиолят;
- агар «Дифко» или аналогичный;
- раствор метилового оранжевого 1 %-ный в 50 %-ном этиловом спирте;
- антигены положительный и отрицательный;
- сыворотку антирабическую или иммуноглобулин;
- мышей белых клинически здоровых массой 6 - 8 г.
5.2Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками
и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по каче
ству не ниже указанных выше. Допускается использование посуды одноразового применения.
6 Отбор проб
6.1 Для проведения исследований на наличие вируса бешенства в лабораторию направляют
патологический материал - свежий труп или голову мелких животных, голову или головной мозг круп
ных животных.
6.2 Отобранный для исследований патологический материал упаковывают во влагонепрони
цаемую тару и доставляют в лабораторию в металлических контейнерах. Замороженный материал
помещают в криоконтейнер.
6.3 Патологический материал сопровождают документом, содержащим следующие данные:
наименование и адрес отправителя, вид животного, анамнестические и клинико-эпизоотологические
данные.
6.4 Лабораторные исследования проводят сразу же при получении патологического материала.
6.5 Для исследования отбирают от крупных животных кусочки ткани из каждого отдела голов
ного мозга (аммоновы рога, мозжечок, кору больших полушарий, продолговатый мозг) размером
0,5 - 1,0 см, мозг мелких животных, например мышей, исследуют целиком.
Для исследования МФА и методом выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной
нейробластомы CCL-131 (или НГУК-1) пригодны только свежие или свежезамороженные пробы ткани
головного мозга. Не допускаются для исследований пробы мозга животных, разлагающиеся (в стадии
загнивания), консервированные глицерином, фиксированные метиловым спиртом, формалином или
другими средствами, способствующими возникновению неспецифической флуоресценции.
Для постановки биопробы допускается использовать пробы мозга, консервированные в 30 % -
50 %-ном растворе глицерина. Использование других консервантов не допускается. Для сохранности
патологический материал может быть заморожен при температуре не выше минус 10 °С.
7 Метод флуоресцирующих антител (МФА)
7.1 Сущность метода
Сущность метода флуоресцирующих антител заключается в специфическом взаимодействии
флуоресцирующих антирабических антител с гомологичным антигеном вируса бешенства. Образую
щийся при этом комплекс «антиген-антитело», меченный ФИТЦ, обнаруживается визуально по харак
терному свечению в поле зрения при рассмотрении под люминесцентным микроскопом.
7.2 Подготовка к исследованию
7.2.1 Подготовка проб
7.2.1.1 Из кусочков ткани, отобранных по 6.5, готовят не менее трех препаратов (отпечатков
или мазков) из каждого отдела мозга на тщательно обезжиренных предметных стеклах. Если состоя
ние патологического материала позволяет, то готовят отпечатки, в остальных случаях делают мазки.
4