ГОСТ Р 55483-2013
бирку с притертой пробкой. Пробирку присоединяют к вакуумирующему устройству (например, ротор
ному испарителю или вакуумному насосу) и упаривают смесь досуха при температуре 60 °С.
При очень низком содержании жира в образце его предварительно выделяют из пробы экс
тракцией органическим растворителем - хлороформом или гексаном по ГОСТ 23042 (метод Соксле-
та).
6.3 Метилирование
6.3.1 К полученному после упаривания жиру прибавляют 3 см315 %-иого раствора ацетилхло-
рида в метаноле и выдерживают смесь на водяной бане при температуре 100 °С в течение 2 ч. В ка
честве реактора для метилирования используют пробирку с пришлифованным обратным холодиль
ником или герметично запаянную ампулу. После окончания гидролиза жира и перевода образующих
ся жирных кислот в форму метилового эфира к охлажденной до комнатной температуры смеси
пипет кой прибавляют 1,25 см3 насыщенного в метаноле раствора гидроксида калия до значения pH
5,0 -6.0, 3 см1насыщенного водного раствора хлорида натрия и 3 см3гексана. Смесь встряхивают и
дают ей отстояться в течение 30 мин или центрифугируют до получения прозрачного верхнего слоя
жидко сти. 1 см3прозрачного верхнего гексанового раствора метиловых эфиров жирных кислот
помещают в виалы для использования в газовом хроматографе.
6.3.2 При использовании животных жиров с низким кислотным числом метиловые эфиры жир
ных кислот можно получать по ГОСТ Р 51486 и ГОСТ Р 51483.
7 Проведение измерений
В соответствии с инструкцией по эксплуатации газового хроматографа проводят его включе
ние. устанавливая давление газа на входном манометре хроматографа 5 МПа. В соответствии с ха
рактеристиками хроматографа задают программируемый метод анализа. Для хроматографа с пла
менно-ионизационным детектором и капиллярной колонкой’ выставляют параметры: повышение тем
пературы колонки в термостате со 100 °С до 260 сС со скоростью 10 °С/мин; температура инжектора
250 СС, детектора 300 °С; поток водорода из генератора или от баллона - 35 см3/мин: поток азота -
20 см3/мин; деление потока 1:100; время анализа 30 мин; ввод 1 мм3пробы.
До измерения анализируемых проб проводят калибровку прибора. Для этого в хроматограф в
автоматическом режиме в соответствии с заданной программой вводят 1 мм3стандартного раствора
метиловых эфиров жирных кислот концентрацией 0,1 мг/см3в гексане или метаноле.
Для промывки шприца в автосамплере и очисти капиллярной колонки применяют
последовательное введение этилового спирта, этилацетата, ацетонитрила и гексана.
В таблицу автоматического обсчета результатов анализа вносят установленные значения
времени выхода пиков для каждого вещества с отклонением
±
0,2 мин. Калибровку проверяют и све
ряют с ранее полученными калибровками ежедневно, а также после выполнения подряд более 10
анализов.
Для уточнения времени выхода пика для каждой жирной кислоты используют метод внутрен
него стандарта. Для этого в раствор пробы вносят известную концентрацию метилового эфира кон
кретной жирной кислоты, превышающую в три - пять раз уровень ее содержания в пробе, и проводят
хроматографирование, устанавливая время выхода нового более интенсивного пика, соответствую
щего времени выхода введенного эфира жирной кислоты.
Для анализа реальных составов жирных кислот животного происхождения необходимо учиты
вать. что высоты пиков основных компонентов животных жиров - пальмитиновой С16:0, стеариновой
С18:0 и олеиновой С18:1п9с в несколько раз интенсивнее пиков остальных жирных кислот, что может
приводить к потере слабых пиков на их фоне в случае сильно разбавленных растворов. Для анализа
сомнительных проб проводят повторное хроматографирование, последовательно разбавляя подго
товленные по 6.3.1 растворы в два. пять или 10 раз для предотвращения превышения на хромато
грамме высоты пиков максимально допустимого значения сигнала. Разбавлением подбирают такую
концентрацию эфиров жирных кислот, при которой мелкие пики программа рассчитывает автомати
чески.
Определение анализируемой пробы, полученной в соответствии с 6.3.1 или 6.3.2, проводят в
автоматическом режиме по заданной программе, записывая хроматограмму.
’ Используется капиллярная колонка HP-Innowax 30 м х 0.32 мм х 0.5 мкм. Данная информация является
рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность ис
пользованиядругих средств измерений с аналогичными свойствами.
5