ГОСТ 23050—2012
- пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 25336;
- 0.9 %-ный раствор натрия хлорида изотонический;
- сыворотку крови лошади нормальную жидкую для культивирования микоплазм на питательных
средах;
- термостат с температурой нагрева (37.0 ± 0.5) °С:
- экстракт дрожжевой сухой очищенный.
6.5.2 Проведение испытаний
Для проверки вакцины на контаминацию микоплаэмами используют полужидкую
(0.3
% агара)
и полутвердую
(1,3
% агара) среду Эдварда с добавлением 10 % нормальной лошадиной сыворотки.
10 % дрожжевого экстракта и
0.5
% глюкозы.
Содержимое трех ампул (флаконов) ресуспензируют
0.9
%-ным раствором натрия хлорида до
исходного объема, затем из каждой ампулы засевают по
0.25
cmj
вирусосодержащей взвеси в две
пробирки с каждой средой. Посевы инкубируют 7 сут при температуре
(37,0 ± 0.5)
°С. Проводят три по
следовательных пассажа.
6.5.3 Учет результатов
На средах должен отсутствовать рост микоплазм.
6.5.4 Определение контаминации микоплазмами с использованием метода полимеразной
цепной реакции (ПЦР)
Контаминацию микоплазмами также определяют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
помощью тест-систем для выявления возбудителей микоплазмозаЧ Метод может использоваться как
альтернативный.
6. 6 Определение активности вакцины по титру инфекционности в культуре клеток
куриных эмбрионов
6.6.1 Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- флаконы вместимостью 50 и 100 см3;
- пипетки градуированные по ГОСТ 29230:
- пробирки по ГОСТ 25336;
- 0.5 %-ный раствор гидролизата лактальбумина - ГЛА;
- культуру клеток куриных эмбрионов в пробирках.
6.6.2 Подготовка к испытанию
Берут пять ампул (флаконов) с вакциной и добавляют среду ГЛА до первоначального объема
указанного на этикетке. После полного растворения вакцины, содержимое всех флаконов объединяют и
готовят последовательные 10-кратные разведения вакцины от Ю ’до 10’8 на среде ГЛА без сыво ротки.
Для каждого последующего разведения вирусвакцины используют отдельную пипетку (наконеч ник).
6.6.3 Проведение испытания
Каждым разведением вакцины, начиная с наибольшего, заражают по четыре пробирки с моно-
споем культуры клеток куриных эмбрионов, внося в каждую по 1см3. В качестве контроля берут четыре
пробирки с культурой клеток, в которые вносят поддерживающую среду без вируса. Окончательный
учет результатов титрования вакцины проводят через 120 ч после заражения.
6.6.4 Обработка результатов
Титр инфекционности вакцины (ТЦД50,СЫ3) определяют пометоду Рида и Менча. Активностьдолж
на составлять не менее Ю50 ТЦД 50(.см.
6.7 Определение активности вакцины по титру инфокционности для кроликов
6.7.1 Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- пипетки градуированные по ГОСТ 29230:
- раствор Хенкса (рабочий) или 0.9 %-ный раствор натрия хлорида (физиологический раствор pH
7.0 - 7,2);
- пробирки по ГОСТ 25336;
Например, тест-система «МИК-КОМ*. Данная информация является рекомендуемой и приведена для
удобства пользователей настоящего стандарта.
6