ГОСТ 31979—2012
9.1.4.2 Стерины соевого масла выделяют из полученного раствора согласно 9.1.1.2. Сухой оста
токнафильтреявляетсястеринамисоевогомасла, которыеотделяютот фильтра ипереносятв стеклян
ную бюксу.
9.2Подготовка хроматографа
Подготовку хроматографа к работе проводят в соответствии с прилагаемой к хроматографу
инструкцией.
9.3 Условия хроматографирования
9.3.1 Установка чувствительности хроматографа
Дозатором вводят в колонку от 3 10-3до 5 •10-3см3раствора для контроля чувствительности
(1 мг свежеприготовленныхстеринов молочногожирапо9.1.2. и 1см3н-пентана). При этом нахроматог
рамме должен появиться один пик. соответствующий холестерину (приложение А. рисунок А.1). Уста
навливают скорость диаграммы, чувствительность детектора и характеристики спектра так. чтобы
высота пика хроматограммы холестеринабыла не менее50 %верхнего предела регистрациизаписыва
ющего устройства.
9.3.2 Определение эффективности разделения стеринов
Дозатором вводят в колонкуот 3 ■10~3до 5 -10 3см3растворадля проверкиэффективности разде
ления (состоит из 0,9 мгстеринов рапсового масла, подготовленныхпо 9.1.3,0,1 мгстеринов молочного
жира, подготовленных по9.1.2, и 1 см3н-пентана). Нахроматограммедолжны появиться пики холестери
на, брассикастерина, кампестерина и p-ситостерина (приложение А. рисунокА.2). Измеряют на хрома
тограмме расстояния, пропорциональные времени удерживания (расстояния от момента введения
раствора в колонку до наивысших точек пиков): dcft— для холестерина, db— для брассикастерина,
dc— для кампестерина. ds— для p-ситостерина. Измеряютширинуоснований пиков ирасстояния меж ду
вершинами пиков (измерение ширины оснований проводят между пересечениями основной линии с
касательными к точкам перегиба с передней и задней сторон вершин), wcn — для холестерина и wb—
для брассикастерина.
Коэффициент разделения рассчитывают поформуле
PR = 2(da- dcn)l(wb* wcn).<1)
Коэффициент разделениядолжен быть не менее 1.0. При коэффициенте разделения 1.5 достига
ется почти полное разделение. Полноеразделение имеет местопри коэффициентеболее 1,5.Для изме
рения ширины основания пика проводят прямые, касательные к точкам перегиба хроматограммы с
каждой стороны пика, до пересечения их с основной линией. Ширина основания равняется отрезку на
основной линии, концами которого являются точки пересечения касательных с основной линией. Под
считывают значение PR поформуле (1).
9.3.3 Проведение повседневного контроля
Вводятв колонкуот3 10-Здо5 ■10 3см3растворадля повседневногоконтроля(состоящего из 1мг
свежеприготовленных стеринов из соевого масла, подготовленных по 9.1.4. и 1см3н-лентана). На хро
матограмме должны появиться пики кампестерина. стигмастерина и рюитостерина (приложение А.
рисунокА.З). Измеряютрасстояние междувершинами пиков dc — длякампестерина. dM— для стигмас
терина иds—для р-ситостерина.
10 Проведение процесса хроматографирования
10.1 Вносят (10 £ 1) мг дигитонина стерина. подготовленного по 9.1.1. в пробирку и добавляют
0,5см3смесиформамида идиметилформамида (1:1 пообъему). При необходимостирастворосторожно
подогревают. Добавляют 2,5 см3 н-пентана в охлажденный раствор, закрывают пробирку пробкой и
перемешивают интенсивным вращением. Оставляют в покое до расслоения и используютдля анализа
верхний слой, содержащий свободные стерины. Расчетное значение массовой концентрации стеринов в
верхнем слое раствора 1мг/см3.
10.2 Температуруколонкиустанавливаютот220°С до 250 °С, а системудозированиядополнитель
но нагревают на (30 £ 10) °С вышетемпературы колонки.
10.3 Скорость подачи азота устанавливают от 30до 60см3/мин.
10.4 Новые колонкидля стабилизации выдерживаютпри условиях 10.2—10.3 и при отключенном
детекторе в течение 16—24 ч.
10.5 Подключаютдетектор, зажигают пламя и регулируют скорость подачи водорода и кислорода
(или воздуха) так. чтобы высота пика хроматограммы холестерина была неменее 50 % верхнего преде
ла регистрации записывающего устройства.
6