ГОСТ 31959-2012
для
Isochrysis galbana
и 5 - 10е
клеток/см3 -
для
Rhodomonas reticulata), культуры водорослей сгущают
(кон
центрируют) с помощью центрифуги и размешивают до состояния суспензии, разбавляя морской водой. Таким
способом получают суспензию водорослей, предназначенную для корма тест-организмов, плотность которой до
стигает примерно 5 - 107 клеток/см3для
Isochrysisgalbana и
3 107 клеток/см3для
Rhodomonas reticulata.
Суспензии
водорослей хранят в холодильнике
при температуре от 0 °С до 4 °С
в течение 7 сут.
В емкости для культивирования тест-организмов вносят корм: по 0,25 см3 суспензии каждого вида водорос
лей на 1 дм3 морской воды, что обеспечивает плотность клеток 2 • 107 клеток/дм3(1.25 • 107 клеток/дм3для
Isochry
sis galbana
и 0,75 • 107 клеток/дм3 для
Rhodomonas reticulata).
Тест-организмы кормят каждый день в одинаковом
объеме при условии, что пища, заданная в предыдущий день, сьедена полностью.
Существует альтернативный режим, когда корм из смешанных водорослей применяют только на науплиаль-
ных стадиях, на более поздних стадиях тест-организмы кормят только водорослями
Rhodomonas reticulata.
В.4 Условия культивирования 77sbe
battagliai
Volkm ann-Rocco
В.4.1 Оборудование и процедура культивирования
Tisbe battagliai
Volkmann-Rocco культивируют в емкостях, содержащих от 2 до 5 дм3 морской воды (см. 5.2).
без аэрации. Используют, как минимум, четыре емкости, чтобы можно было разделить тест-организмы по возрасту
и обеспечить постоянное возобновление тест-организмов для тестирования.
Морскую воду, в которой выращивают тест-организмы, обновляют один раз в неделю: использованную мор
скую воду с тест-организмами пропускают через несколько нейлоновых сит с ячейками различного размера в зави
симости от того, какого возраста тест-организмы должны быть отделены, в порядке, приведенном в таблице В.5.
Т а б л и ц а В.5
Ра>ые» ячейки сита ьки
60
100
140
180
250
Характеристика стадии удерживаемого организма
Удерживает все стадии
Удерживает все стадии, кроме науплиев в возрасте 0 - 2 сут
Удерживает копеподитов старше 5 сут и взрослых особей
Удерживает поздних копеподитов и взрослых особей
Удерживает большую часть взрослых
особей
Тест-организмы, которые необходимо сохранить для возобновления данной культуры, переносят из сита в
свежую морскую воду (см. В.1.2). Следует отметить, что колеподиты и взрослые особи прилипают к стенкам емко
сти. но их можно смыть на сито с помощью струи морской воды из пипетки или бутыли.
Для обычных целей новые культуры возобновляют путем отделения молоди от взрослых особей во время
еженедельной замены морской воды с использованием сит с ячейками размером 180 и 60 мкм. Последующие
отделения особей по стадиям жизненного цикла с более короткими интервалами используют для отделения тест-
организмов с меньшей разницей в возрасте, если, например, эти тест-организмы выращивают для дальнейшего
использования при тестировании.
В.4.2 Регулирование плотности популяции
Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции, которая была начата особями в возрас
те менее семи суток, до конца первой недели, когда плотность популяции обычно не превышает 100 особей на 1
дм3 Рекомендуется избавляться от взрослых особей в возрасте 4 - 5 недель.
В.4.3 Кормление
Tisbe battagliai
Volkmann-Rocco питаются морскими водорослями. Успешно зарекомендовала себя
одна из водорослей.
Isochrysis galbana.
хотя смесь этой водоросли с
Rhodomonas reticulata
лучше усваива
ется тест-организмами. Культивирование водорослей и подготовка культур - в соответствии с требованиями
В.3.3.
Если для корма используют только водоросли
Isochrysis galbana.
то на 1 дм3 свежей морской воды вно
сят 5 см3 суспензии водорослей (плотность 5 • 107 клеток/см3) (см. В. 1.2). чтобы обеспечить плотность водо
рослей. равную 2.5 • 10а клеток/дм3. Если используют оба вида водорослей, то на 1 дм3 воды вносят 3 см3
суспензии водоросли
Isochrysis galbana
и 2 см3
Rhodomonas reticulata
(плотность 3 • 107 клеток/см3) (что обе
спечивает плотность 1.5 - 10е клеток/дм3 водоросли
Isochrysis galbana
и 0.6 - 108 клеток/дм3 водоросли
Rho
domonas reticulata).
Обычно тест-организмы при культивировании кормят ежедневно.
При содержании взрослых тест-
организмов с более высокой плотностью популяции требуется соответственно и дополнительное питание в таком
же обьеме (указанном выше) один или два раза в неделю, но при условии, что предыдущая порция пищи сьедена.
Тест-организмы, состоящие из науплиев в возрасте одной недели и копеподитов ранних стадий, обычно не требу ют
дополнительного питания.
22