ГОСТ 31959-2012
Приложение В
(обязательное)
Методы культивирования тест-организмов
В.1 Условия культивирования тест-организмов
В. 1.1 Исходный материал для культивирования тест-организмов получают в лабораториях, занимаю
щихсятестированием, имеющихкультуру требуемой видовойпринадлежности. Чувствительность культур к
модельному токсиканту должна соответствовать установленному в настоящем стандарте диапазону ЛКМ
за 48 ч (штод Б) илиЛК^ за 72 ч (методА).
Тест-организмы культивируют и содержат вклиматостате, в инкубаторе, на водяной бане или в помещении с
регулируемой температурой (20 ± 2) °С.
При ЭТОМобеспечиваютестественное или
искусственное
освещение так. чтобы соблюдались следующие перио
ды выдержки: 16 ч - воздействие света при освещенности 500 - 1000 лк, 8 ч - без воздействия света (в темноте).
Nitocra spinipes
Boeck и
Tisbe baitagHai
Volkmann-Rocco необходимо защищать or воздействия прямого света.
Acartia tonsa
Dana может чувствовать себя лучше при освещенности среды с культурой тест-организмое до 2200 лк.
Тест-организмы и морская вода, в которой происходит их культивирование, должны содержаться в емкостях
только из стекла или полимерного материала, изготовленного без использования пластификатора.
П р и м е ч а н и я
1
Морские колеподы
Acartia tonsa
Dana.
Tisbe battagliai
Volkmann-Rocco и
Nitocra spinipes
Вовек имеют ши
рокое географическое распространение, обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства
и оборудования для культивирования и проведения тестирования. Организмы могут культивироваться постоянно
в лабораторных условиях.
2 Развитие копепод (веслонотх раков) проходит через шесть науплиальных стадий и пять стадий копеподи-
тов. после чего наступает взрослая стадия. При температуре 20 °С развитие только что вылупившихся науплиев
до взрослой стадии проходит за 1 0 - 1 4 сут. Науплии выпускаются непосредственно из яйцевого мешка
женской особью
Tisbe battagliai
Volkmann-Rocco и
Nitocra spinipes
Boeck в течение 3 - 4 сут.
Acartia tonsa
Dana выпускает яйца в течение 2 - 3 сут.
3
Приведенная в данном приложении информация предназначена для использования только в качестве
общего руководства.
В. 1.2 Вода для культивирования тест-организмов
-по 4.2 и
5.2
(далее - морская вода) в зависимости от ме
тода тестирования:
при необходимости корректируют
минерализацию
(соленость) воды в соответствии с усло
виями тестирования.
В.1.3 Емкости, применяемые для культивирования тест-организмов, должны быть оснащены свободными
или перфорированными крышками, чтобы уменьшить испарение, но обеспечить газообмен. Потеря морской воды
из-за испарения должна возмещаться путем добавления дистиллированной или деионизированной воды.
В. 1.4 Емкости тщательно моют при каждой замене морской воды.
В.1.5 В
качестве корма
используют культуру морских одноклеточных водорослей (десятисуточную).
В.2 Условия подготовки к тестированию Artemia salina
L.
В.2.1 Оборудование и процедура получения науплиев
Для тестирования используют науплиев Artemia salrna L в возрасте одних суток (синхронизированная
культура), которые получают влаборатории из яиц.
Яйца хранят в холодильнике.
Каждую новую партию яиц проверяют на выклев. Используют яйца при выклевв не ниже 80 %.
что
опре
деляет в дальнейшем физиологическую чувствительность тест-организмов односуточных науплиев Artemia
salina L.
Тест-организмы для тестирования получаютследующим способом:
- в стакан вместимостью 500 см
3
помещают 0.1 г сухих яиц Artemia salina L.. запивают водопроводной
питьевой водой и выдерживают 30 мин.
П р и м е ч а н и е - Водопроводную питьевую воду предварительно отстаивают и аэрируют в течение одних
суток:
-
через 30 мин. не взбалтывая содержимого стакана, сливают слой воды над яйцами, которые осели на
дно стакана, удаляя таким образом всплывшие погибшие яйца и пустые
оболочка.
Процедуру повторяют не
менее трех раз (заполняют стакан водой и сливают воду):
19