ГОСТ 31959-2012
Окончательное тестирование проводят по 4.4.3. При этом
используют не менее пяти разбавле
ний (концентраций) анализируемых проб, применяют не менее трех чашек Петри для каждого раз
бавления (концентрации) и не менее 60 тест-организмов.
Пример проведения окончателыюго тестирования и устаювлония значений средней леталь
ной концентрации 72 ч ЛК50 для вещества приведен в приложении А.
4.4.3 Процедура тестирования
4.4.3.1
Для каждой серии
разбавлений
(концентраций)
анализируемых проб
используют контроль
ную пробу, содержащую объем морской воды (см. 4.2 или 4.3.2). равный объему анализируемого рас
твора одного из разбавлений (одной из концентраций) пробы.
Контрольная проба,
а также вода для замачивания яиц Artomia salina
L должны соответствовать
минерализации (солености)
анализируемой пробы.
4.4.3.2
Перед началом тестирования
в емкости вместимостью 200 см
г3
вносят по 150 см3 ана
лизируемой пробы заданного разбавления (концентрации) (см. 4.3.4.6)
и измеряют концентрацию рас
творенного кислорода и pH. Измеряемые характеристики должны соответствовать указанным в 4.3.4.5.
Аналогичную процедуру проводят
для контрольной пробы (см. 4.4.3.1).
П р и м е ч а н и е - Объем (150 см3) каждого разбавления ( концентрации) пробы достаточен для розлива в
три чашки Петри по 40 см3 при проведении тестирования.
4.4.3.3
В каждую
чашку Петри (см. 4.4.1 и 4.4.2)
вместимостью 50 см3 вносят 40 см3
ана
лизируемой
пробы (см.
4.3.4.6). соответствующей требованиям 4.4.3.2.
затем помещают по
20
экземпляров тест-организмов.
Тест-организмы рекомендуется переносить пипеткой с достаточно
широким внутренним диаметром (пипеткой Пастера), чтобы не повредить их. Аналогичную проце
дуру проводят и для контрольных проб (см. 4.4.3.1).
Посадку тест-организмов начинают с кон
трольных проб. При этом плотность посадки не должна превышать один тест-организм на 2.0
см3раствора.
В анализируемые пробы тест-организмы помещают, начиная с меньших концентраций ве
ществ (больших разбавлений проб).
После окончания посадки тост-организмов в чашки Петри с анализируемыми пробами каждого
разбавления (концентрации) пипетку Пастера промывают морской водой.
Не допускается во время тестирования кормить тест-организмы
и менять растворы.
4.4.3.4
Тестирование проводят
в климатостате (см. 4.2)
при температуре (20 ± 2) °С в течение
3 - 4 сут. имитируя
светлый период - 16 ч и темный период - 8 ч.
П р и м е ч а н и е - Допускается проводить тестирование в помещении с регулируемой температурой, инку
баторе или на водяной бане, обеспечивающих указанный режим тестирования.
4.4.3.5 Подсчитывают каждые сутки через
24. 48,
72 ч (96 ч)
в каждой
чашке Петри
количество
живых тест-организмов,
при этом пипеткой удаляют мертвые тест-организмы.
Для подсчета
тест-
организмов
используют микроскоп. Мертвыми считают тест-организмы, которые в период подсчета не
плавают или не двигают отростками в течение 10 с
после легкого постукивания по чашке Потри. Для
каждой анализируемой пробы заданного разбавления (концентрации), в толi числе контролыюй,
регистрируют количество выживших тест-организмов после 24. 48. 72 ч (96 ч) тестирования.
Ре
гистрируют также
любые
отклонения внешнего вида или поведения тест-организмов по сравнению с
тест-организмами в контрольной пробе.
4.4.3.6 После подсчета выживших тест-организмов измеряют в анализируемых и контрольных
пробах концентрацию растворенного кислорода и pH.
4.5 Обработка результатов
4.5.1 По результатам тестирования (подсчета выживших тест-организмов см.4.4.3.5) для
каждого заданного разбавления (концентрации) анализируолюй пробы, в том числе контрольной,
рассчитывают среднеарифметическое значение выживших тест-организмов.
4.5.2 Определение токсичности анализируемых проб
4.5.2.1Токсичность анализируемых проб А. %. определяют по гибели niecm-организмов для
каждого заданного разбавления (концентрации) анализируемой пробы относительно контрольной
пробы после 72 ч (96ч) тестирования и рассчитывают по формуле
10