ГОСТ Р ИСО 16000-17—2012
полученными путем прямого посева или на основе суспензий спор грибков, можно обращаться соот
ветствующим образом.
7.1.1 Пробы, полученные методом осаждения
Чашки Петри с агаром напрямую помещают в инкубатор для культивирования (см. 7.3).
7.1.2 Пробы, полученные методом ф ильтрования
Пробы с фильтров экстрагируют, аликвоты переносят в чашки Петри с агаром (см. 7.2), а затем
помещают в инкубатор для культивирования (см. 7.3).
Пробы обрабатывают в лаборатории предпочтительно без задержек и не позднее, чем через 48 ч
после окончания отбора проб. Хранят пробы в лаборатории при температуре, не превышающей темпе
ратуру культивирования (< 25 °С), в темном месте, защищенном от неблагоприятных воздействий (влаж
ность. пересушивание, загрязнение). Регистрируют условия окружающей среды в месте хранения.
Все операции выполняют в условиях, исключающих возможность загрязнения проб. Проверяют
асептические условия регулярно с помощью средств контроля, а результаты оформляют документально.
7.2 Обработка ф ильтров
7.2.1 О сновные положения
Плесневые грибки, осажденные на фильтры из воздуха, анализируют методом непрямого посева.
П р и м е ч а н и е — Агрегаты спор или агрегаты частиц могут быть переведены в раствор посредством су
спендирования или растворения, в результате подсчет может показать наличие большего числа колоний после
культивирования. В таких случаях из агрегата, состоящего из 30 спор, может вырасти 30 колоний. С другой сторо ны.
может произойти уменьшение числа колоний, например из-за неполного извлечения спор плесневых грибков с
филыров или повреждения клеток грибков при обращении с ними в лаборатории.
7.2.2 Экстракция
В асептической атмосфере бокса микробиологической безопасности (см. 5.6) стерильным пинце
том переносят фильтры (желатиновый фильтр на поликарбонатном фильтре) в стерильные контейне
ры. содержащие 5 мл соляного раствора с полисорбатом 80 (см. 6.5).
Интенсивно встряхивают (см. 5.8) фильтры в контейнерах, следя за тем, чтобы они оставались
погруженными в раствор в горизонтальном положении, на водяной бане при температуре от 35 ’ С до 40
еС (см. 5.7) в течение 15 мин. Убеждаются в том, что загруженная спорами поверхность фильтра лежит
ровно, обращена вверх и легко перемещается в суспензии при встряхивании.
Обрабатывают пробу в соответствии с 7.2.3 в течение 1 ч после суспендирования.
7.2.3 Растворение
На основе исходной суспензии приготовляют серию разбавленных.
Непосредственно перед разбавлением встряхивают суспензию в течение 1 мин с помощью шей
кера для пробирок (см. 5.8). Добавляют 1 мл суспензии к 9 мл соляного раствора (см. 6.4) стерильной
одноразовой пипеткой или стеклянной пипеткой с хлопковым фильтром. Аналогичным образом
прово дят дальнейшее разбавление до 1:10,1:100 и 1:1000.
Число этапов разбавления и коэффициенты разбавления должны быть подобраны в соответствии
с ожидаемым содержанием спор плесневых грибков и конкретной целью измерений. Могут потребо
ваться дополнительные этапы разбавления.
7.2.4 Посев
Делают параллельный посев 0,1 мл исходной суспензии и разбавленных суспензий (см. 7.2.3)
на агар DG18 (см. 6.1), агар на солодовом экстракте (см. 6.2) или на картофельный агар с декстрозой
(см. 6.3). Параллельно приготовляют по крайней мере две чашки Петри для каждого этапа разбавления
и температуры в инкубаторе (см. 7.3).
Если в соответствии с протоколом отбора проб ожидается низкое содержание спор плесневых
грибков, то может быть сделан посев 1 мл исходной суспензии в четыре чашки Петри с разной агаровой
питательной средой (250 мкл суспензии на каждую чашку) для повышения чувствительности метода.
На всех этапах разбавления отбирают лабораторную холостую пробу.
7.3 Культивирование
Загруженные чашки Петри с агаром помещают в инкубаторы верхней стороной вверх на семь су
ток при температуре (25 ± 3) еС. Для чашек Петри с агаром DG18 может потребоваться более длитель
ное время инкубации — до 10 дней, особенно если ожидается наличие грибков разных видов.
5