ГОСТ Р ИСО 16000-17—2012
С особой целью (например, в случае теплостойкого Aspergillus spp.) чашки Петри с агаром на со
лодовом экстракте или картофельном агаре с декстрозой могут быть дополнительно помещены в инку
батор при температуре (36 ± 2) °С. Для селективного культивирования Aspergillus fumigatus необходима
температура (45 ± 2) °С.
Предупреждение — При температурах культивирования выш е 25 °С следят за тем, чтобы
предотвратить перосушивание агара в чашках Петри.
Культивирование в чашках Петри с агаром осуществляют таким образом, чтобы в них попадало
достаточное количество кислорода, обеспечивающее оптимальные условия роста колоний, например не
помещают чашки Петри в плотные полиэтиленовые пакеты. Инкубатор для чашек Петри с агаром должен
быть беэвибрационным для сведения к минимуму вероятности вторичного внесения посевного
материала из-за рассеяния спор. Также предотвращают воздействие интенсивных потоков воздуха на
агаровую среду, чтобы не допустить ее пересушивание.
7.4 Анализ и подсчет
Осматривают чашки Петри с агаром первый раз через два-три дня после посева и затем через
равные промежутки времени в течение по крайней мере семи дней.
Подсчитывают теплоустойчивые плесневые грибки (растущие при температуре от 36 гС до 45 °С)
по истечении одного—трех дней, поскольку они растут очень быстро.
При обращении с чашками Петри с агаром может произойти рассеяние спор на питательной среде
и рост вторичных колоний в процессе культивирования. Следят за тем. чтобы осуществлялся подсчет
только первичных колоний.
При использовании стандартной чашки Петри диаметром 90 мм для идентификации и количе
ственного определения оптимальное число колоний рода/вида составляет от 20 до 40. Для получения
количественных результатов на чашке Петри должно вырасти по крайней мере 10 колоний соответ
ствующего рода/вида и не более 100 колоний в целом. Некоторые плесневые грибки могут рассеи
ваться очень быстро, подавляя при этом рост других колоний (например. Rhizopus. Chrysonilia. Mucor,
Botrytis). — даже на чашках Петри с дихлораном — и емкость питательной среды в чашке может умень
шиться. даже при низких отсчетах по колониям.
Записывают максимальное число колоний, подсчитанных за семь дней культивирования для каж
дой чашки Петри с агаром и для каждого объема пробы (при отборе проб методом осаждения) или
коэффициента разбавления (при отборе проб методом фильтрования) соответственно.
7.5 Идентификация видов плесневых грибков
Идентификация плесневых грибков, растущих на питательной агаровой среде, необходима для
разрешения большинства вопросов, касающихся проблем наличия грибков в воздухе замкнутых по
мещений. Идентификация основана на макроскопических и микроскопических морфологических ха
рактеристиках. Эти характеристики обычно лучше идентифицировать при культивировании на агаре на
солодовом экстракте или на картофельном агаре с декстрозой по сравнению с агаром DG18.
П р и м е ч а н и е — Было показано, что при использовании агара на солодовом экстракте и картофельного
агара с декстрозой получают сопоставимые результаты для идентификации родов и видов плесневых грибков.
Степень идентификации зависит от целей исследования.
Для обнаружения источников роста плесневых грибков в замкнутом помещении важно выявить
разницу видового/родового состава грибков в воздухе замкнутого помещения и атмосферном воздухе, а
также индикаторы влажности, например Aspergillus versicolor или Chaetomium spp.
Для этой цели не рекомендуется проводить идентификацию на уровне вида в пределах некоторых
родов (например. Phiatophora. Trichoderma, Acremonium, Chaetomium. Penicillium и Fusarium). поскольку
это очень трудоемко и практически неосуществимо в рамках рутинного анализа.
Однако подробная идентификация видов грибков может быть необходима для исследования про
блем здоровья населения. В этом случав идентификацию видов проводят даже для родов, указанных
в предыдущем абзаце.
Для идентификации большинства видов из колоний, выращенных на изолированной питательной
среде, берут чистые культуры и переносят на специальную питательную среду для идентификации.
Идентификацию видов плесневых грибков проводят в лабораториях, имеющих разрешение на
микологическую экспертизу и опыт по идентификации микрогрибков, или проверяют результаты для
обеспечения их достоверности. Аккредитация лаборатории на проведение микологической экспертизы
6