ГОСТР ИСО 30024—2012
Окончание таблицы 2
Стадия анализа
Эталонный лолоримвтричвсшй
раствор
Контрольная проба
Раствор субстрата фитата {4.18}
0.8 см3
0.8 см3
Стоп-реагент (4.13)
0.8 см3
0.8 см3
Перемешивание
Да
Да
Комнатная температура
10 мин
Юмин
Центрифугирование
3 мин при 11000—20000д
3 мин при 1 Ю00—20000д
Спектрофотометр (5.11)
415 нм (по сравнению с водой)
415 нм (по сравнению с водой)
8.4 Контроль уровня фитазы
Проводяттри определениядля каждого разбавления идвух контрольных проб, результаты усред
няют. Методика приведена втаблице 3.
В случае определяемых растворовдля контроля уровня фитазы. отбирают пипеткой 0,36 см3аце
татного буфера с концентрацией 0.25 моль/дм3, содержащего полисорбат 20 с массовой долей
0.01 % (4.16). в пробирку вместимостью 2 см3 (5.12). Добавляют 0.04 см3разбавленного раствора для
контроляуровняфитазы(8.2.2). Перемешивают пробу. Выдерживаютрастворы втечение5 минпритем
пературе 37 °С. Добавляют 0,8 см3 раствора субстрата фитата (4.18). предварительно нагретого до 37
°С. Выдерживаютровно 30 мин при температуре 37 °С. Через 30 мин добавляют 0.8 см3стоп-реаген-та
(4.13) иперемешивают. Выдерживают растворыв течение 10мин прикомнатнойтемпературе изатем
центрифугируют их в течение 3 мин при 11000—20000д. Измеряют оптическую плотность D(415)
прозрачной надосадочной жидкости.
В случае растворов контрольных проб для контроля уровня фитазы. отбирают пипеткой 0.36 см3
ацетатного буфера(4.15)в пробирку вместимостью2 см3(5.12).Добавляют0,04см3разбавленногорас
твора для контроля уровня фитазы (8.2.2). Порядок добавления растворов отличается от порядка,
используемогодля определений. Выдерживают растворы контрольных пробв течение5 мин при темпе
ратуре 37 °С. Затем, в качествестадии 1,добавляютстоп-реагент (4.13); в качествестадии2 добавляют
растворсубстратафитата (4.18). предварительнонагретыйдо 37 °С.Далеедействуютв соответствии с
таблицей 3. колонка 3. строка 9 ит.д.
Т а б л и ц а 3 — Методика контроля уровня
Стадия анализа
Проба контроля уровняКонтрольная проба
Ацетатныйбуферконцентрацией
0,25 моль/дм3. содержащий полисорбат 20
с массовой долей 0.01 % (4.16)
0.36 см3
0.36 СМ3
Разбавленный раствор для контроля уровня
фитазы (8.2.2)
0.04 см3
0,04 см3
Перемешивание
Да
Да
Предварительная выдержка при 37 °С
5 мин
5 мин
Раствор субстрата фитата (4.18} при 37 *С
0.8 см3
0.8 см3: стадия 2
Перемешивание
Нет
Нет
Выдержка при 37 ‘С
30 мин
Нет
Стоп-реагент (4.13)
0.8 см3
0.8 см3: стадия 1
Перемешивание
Да
Да
Комнатная температура
10 мин
10 мин
Центрифугирование
3 мин при 11000—20000д
3 мин при 11000—200000
Спектрофотометр (5.11)
415 нм (по сравнению с
водой)
415 нм (по сравнению с водой)
5