ГОСТ Р ИСО 30024—2012
8.5 Анализируемые пробы кормов
Проводят три определениядля каждого экстракта (см. раздел 7) идвух контрольных проб, резуль
таты усредняют. Методика приведена в таблице 4.
При проведении анализа отбирают пипеткой 0.3 см3 ацетатного буфера с концентрацией
0.25 моль/дм3, содержащего полисорбат 20 с массовой долей 0.01 % (4.16). в пробирку вместимостью
2 см3(5.12). Добавляют 0.1 см3 экстракта корма (раздел 7) в качестве испытуемой пробы. Содержимое
пробиркиперемешивают. Предварительновыдерживаютвтечение5 мин при температуре37°С. Добав
ляют0,8 см3растворасубстратафитата(4.18).предварительно нагретогодо 37°С. Выдерживаютровно
30 мин при 37 еС. Добавляют0,8 см3стоп-реагента (4.13) иперемешивают. Выдерживаютпробирку с ее
содержимым в течение 10 мин при комнатной температуре и центрифугируют в течение 3 мин при
11000—20000д. Измеряютоптическую плотность D(415) прозрачной надосадочной жидкости.
В случае растворов контрольныхпроб отбирают пипеткой 0.3 см3 ацетатногобуфера с концентра
цией 0.25 моль/дм3, содержащего полисорбат20с массовойдолей0.01 %(4.16). в пробиркувместимос
тью 2 см3 (5.12). Добавляют 0.1 см3 экстракта корма (раздел 7). Порядок добавления растворов
отличается от порядка, используемого для испытуемой пробы. Предварительно выдерживают кон
трольные пробы втечение5 мин при 37 °С. Затем, в качествестадии 1,добавляютстоп-реагент (4.13); в
качестве стадии 2 добавляют раствор субстрата фитата (4.18), предварительно нагретый до 37 °С.
Далее действуют в соответствии стаблицей 4. колонка 3. строка 9 ит. д.
Т а б л и ц е 4 — Методика для испытуемых проб корма
Стадия анализаПроба кормаКонтрольная проба
Ацетатныйбуферконцентрацией
0.25 моль/дм1. содержащий полисорбат 20
с массовой долей 0.01 % (4.16)
0.3 см3
0.3 см3
Испытуемая проба*
0.1 см3
0.1 см3
Перемешивание
Да
Да
Предварительная выдержка при 37 *С
5 мин
5 мин
Раствор субстрата фитата (4.18) при 37 °С
0.8 см3
0.8 см3 (стадия 2)
Перемешивание
Нет
Нет
Выдержка при 37 *С
30 мин
Нет
Стоп-реагент (4.13)
0.8 см3
0.8 см3 (стадия 1)
Перемешивание
Да
Да
Комнатная температура
10 мин
10 мин
Центрифугирование
3 мин при 11000—20000д
3 мин при 11000—20000д
Спектрофотометр (5.11)
415 нм (по сравнению с водой)
415 нм (по сравнению с водой)
* Для испытания использовали испытуемые пробы с активностью не более 200 единиц активности фитазы на
1 кг корма, экстракт пробы 0.2 см1 и 0.2 см ’ ацетатного буфера концентрацией 0.50 моль/дм1. содержащего поли
сорбат 20 с массовой долей 0.01 % (4.17) (разбавление 1 к 2). Пробы с активностью более 2000 единиц
активнос ти фитазы на 1 кг корма необходимо надлежащим образом разбавить ацетатным буфером с
концентрацией
0.25 моль/дм1. содержащим полисорбат 20 с массовой долей 0.01 % (4.16).
9 Обработка результатов
9.1 Градуировочная кривая
Строятградуировочную кривую сдО(415)[D(415)s— 0(415)ь).где 0(415)sи0(415)ь—средние зна
чения оптической плотности эталонных растворов и контрольной пробы соответственно, полученные с
помощью эталонныхрастворовфосфата (8.2.1 и 8.3). наосиординат и рассчитанными значениями кон
центрациифосфата—наосиабсцисс{впроцессерасчетапри разбавлении 1к 10 в микроцентрифужной
пробирке [0.04 см3разбавленного эталонного раствора (таблица 1) плюс0.36 см3буфера] для реакции
следует принять во внимание концентрацию фосфата в эталонном растворе). Наиболее подходящую
6