ГОСТ Р ИСО 30024—2012
8 Методика работы
8.1 Растворы контрольной пробы
Неорганический фосфатв пробе содействуетформированию окраски. Таким образом, для каждой
пробы предусмотрены растворы контрольной пробы. Для расчетаактивностифитазы контрольные зна
чения вычитают изиспытуемыхзначений.
8.2 Эталонные растворы
8.2.1 Эталонные растворы фосфата
Исходный эталонный раствор фосфата (4.19) разбавляют ацетатным буфером с концентрацией
0,25мол ь/дм3,содержащим пол исорбат20с массовойдолей0.01 % (4.16). всоответствиистаблицей 1.
Т а б л и ц а 1 — Порядок проведения разбавлений с целью получения эталонных колориметрических растворов
для построения кривой фосфата
Эталонный раствор
Количество объемов
исходного эталонного
раствора
фосфата (4.19)
Количество объемов
ацетатного буфера
концентрацией
0.25 моль/дм’. содержащего
полисорбат 20 с массовой
долей 0.01
%
(4.16)
Коэффициент
рээбавления
Концентрация.
мкмолъ/см5"
А
1
1
2
25
В
1
3
4
12,5
С
1
7
8
6,25
D
1
15
16
3.125
" Рассчитывают точные концентрации (4.19).
8.2.2 Контроль уровня фитазы
В каждом случае, когда пробы выдерживают, предусмотрен контроль уровня фитазы. Исходный
эталонный раствор фитазы (4.20) с известной активностью разбавляют до конечной активности
0.15—0,25 ед./см3 и точную активностьопределяютсогласно 8.4.
8.3 Градуировочная кривая
Проводяттри определениядля каждогоразбавленияфосфата идвухконтрольныхпроб, результа
ты усредняют. Методика приведена в таблице 2.
В случае эталонных растворов фосфата отбирают пипеткой 0.360 см3ацетатного буфера концен
трацией 0,25 моль/дм3, содержащего полисорбат 20 с массовойдолей 0.01 % (4.16). в пробирку вмести
мостью 2см3(5.12). Добавляют 0.04 см3эталонного раствора фосфата (таблица 1).
В случае контрольной пробы фосфатаотбирают пипеткой 0.4 см3ацетатного буфера с концентра
цией 0.25 моль/дм3, содержащего полисорбат20с массовойдолей0.01 %(4.16). в пробиркувместимос
тью 2 см3(5.12).
В обоихслучаяхдобавляют0,8см3растворасубстратафитата(4.18)и 0,8см3стоп-реагента (4.13).
Перемешиваютсодержимое пробироки выдерживают их в течение 10 мин при комнатной температуре.
Центрифугируют (5.8) пробирки в течение 3 мин при 1ЮОО—20000д и измеряют оптическую плотность
прозрачной надосадочной жидкости придлине волны 415 нм. D(415).
Т а б л и ц е 2 — Методика построения градуировочной кривой
Стадия анализа
Эталонный колориметрический
раствор
Контрольная проба
Ацетатный ^ буфер концентрацией
0.25 моль/дм5. содержащий полисорбат
20 с массовой долей 0,01 % (4.16)
0.360 см3
0.400 см3
Эталонный раствор фосфата (8.2.1)
0.04 см3
0.00 см3
4