ГОСТ Р 55302—2012
4 Метод определения ферментативной активности ксиланазы
с субстратом ксилан
4.1 Сущность метода
4.1.1 Метод основам на количественном определении редуцирующих (восстанавливающих)
сахаров, образующихся врезультате действия фермента ксиланазы на ксилан при температуре 50 X .
4.1.2 За единицу ксиланазной активности принимают количество фермента, действующего на
ксилан из березы с высвобождением 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в глюкозном эквивален
те), образующихся за 1 мин при стандартных условиях (температура 50 °С и значение кислотности
5.0 вд. pH).
4.1.3 Содержание редуцирующих сахаров, образующихся в результате ферментативной реак
ции. определяют колориметрическим методом, основанным на взаимодействии сахаров с реактивом
Шомоди— Нельсона [2]. В результате этой реакции образуется соединение голубого или бирюзового
цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию редуцирующих сахаров, обра
зовавшихся в процессе ферментативной реакции. Интенсивность окраски полученных растворов
измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине световой волны 610 нм;
активность выражается в ед. КС/г или ед. КС/см3анализируемого препарата.
4.2Требования безопасности
4.2.1 При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при
работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007 и ГОСТ 12.4.103.
4.2.2 Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть оснащено приточно-вытяж
ной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021.
4.2.3 Электробезопасность при работе с электроустановками — по ГОСТ 12.2.007.0 и по
ГОСТ Р 12.1.019.
4.2.4 Организация обучения работающих безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
4.2.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по
ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
4.2.6 Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, уста
новленных ГОСТ 12.1.005.
4.3Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы
4.3.1Для определения ксиланазной активности используют следующие средства измерений,
вспомогательное оборудование, посуду, реактивы, материалы:
- весы по ГОСТ Р 53228. обеспечивающие точность взвешивания с пределом допускаемой абсо
лютной погрешности не более ± 0.3 мп
- фотоэлектроколориметр (КФК-3) или спектрофотометр (СФ) любого типа, которые обеспечива
ют измерения при длине световой волны 610 нм с погрешностью измерения коэффициента пропуска
ния не более 1 % (не более 0.01 единицы оптической плотности);
- холодильник бытовой;
- pH-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 ед. pH с пределом допускаемой
погрешности в эксплуатации ± 0.1 ед. pH;
- мешалку магнитную любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин 1;
- ультратермостат или термостат водяной с точностью регулирования температуры ± 1 X ;
- центрифугу лабораторную любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее
7000 мин’1;
- баню водяную любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100 ± 1) X ;
- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью ± 1,5 с;
- пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 1,0 см3. 1,0 см3, от 0.2 до 5,0 см3 и от 2.0 до
10.0 см3с наконечниками;
- встряхиватель V-3 типа Вортекс или аналогичный для перемешивания жидкости со скоростью
вращения от 50 до 3400 об/мин;
- термометры ртутные стеклянные лабораторные по ГОСТ 28498 от 0 X до 50 X и от 0 X до
100 X , ценой деления 0,1 X или 0.5 X ;
- ареометры общего назначения по ГОСТ 18481;
- стаканы и колбы стеклянные лабораторные В-1-150 ТС. В-1-800 ТС, Кн-1-100-14/23 ТС по
ГОСТ 25336;
3