ГОСТ Р 55302—2012
Пробирки охлахадают в холодной воде, добавляют по 1 см3 реактива Нельсона, приготовленного
по 4.4.3, и выдерживают в течение 10 мин. периодически тщательно перемешивая, после чего вносят
по 7 см3дистиллированной воды, доводя объем содержимого пробирки до 10 см3.
Одновременно готовят контрольную пробу на реактивы по 4.6.2. Оптические плотности раство
ров глюкозы измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине световой волны
>.= 610 нм в кюветах с толщиной поглощающего светового слоя 10 мм в сравнении с контролем на
реактивы.
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют среднеарифметическое зна
чение результатов оптической плотности трех параллельных измерений.
По полученным среднеарифметическим значениям результатов строят градуировочный график
зависимости оптической плотности (поглощения) от массовой концентрации глюкозы (мг/см3). Рабочая
зона градуировочного графика лежит в пределах от 0,10 до 1,1 единицы оптической плотности.
На оси абсцисс X откладывают массовую концентрацию глюкозы С в мг/см3; на оси ординат
Y — соответствующие значения оптической плотности О при А.= 610 нм. На рисунке 1 приведен пример
градуировочного графика. Величина, обратная тангенсу угла наклона калибровочной кривой,
состав ляет, например, 0,098 (1/tg = 0.098), что является коэффициентом К. входящим вформулу
расчета кси-ланазной активности. Величина коэффициента может меняться в зависимости от
приготовленных реактивов Шомоди и Нельсона. Таким образом, эта величина равна массовой
концентрации глюкозы в рабочем растворе, отложенной на оси X, при оптической плотности на оси
У, равной 1.0.
Оппыпжая плотность
Рисунок 1 — Пример градуировочного графика
Градуировочный график строят каждый раз при приготовлении новых реактивов Шомоди и Нель
сона, а также при замене прибора.
4.5 Подготовка пробы
4.5.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 20264.0.
Анализируемые пробы ферментных препаратов в форме порошка или жидком виде можно
использовать без предварительной подготовки.
4.5.2 Приготовление основного раствора анализируемой пробы ферментного препарата
В стаканчик для взвешивания помещают (0,1000 ± 0,0001) г сухого ферментного препарата или
(1.00 i 0,01) г жидкого ферментного препарата и суспендируют в небольшом количестве дистиллиро
ванной воды. Суспензию количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят
объем до метки дистиллированной водой при температуре 20 °С и тщательно перемешивают. Приго
товленный раствор ферментного препарата является основным раствором анализируемого образца.
Срок хранения основного раствора ферментного препарата при температуре 20 X — не
более 1 ч.
4.5.3 Приготовление рабочего раствора анализируемого образца ферментного препарата
Рабочий раствор анализируемого ферментного препарата готовят из основного раствора по4.5.2
путем дальнейшего разведения его дистиллированной водой таким образом, чтобы при определении
активности оптические плотности опытного и контрольного растворов находились в пределах рабочей
зоны градуировочного графика по 4.4.6.
Количество фермента, взятого для анализа, должно быть рассчитано так, чтобы в реакционной
смеси по 4.6.1.2 присутствовал избыток субстрата ичтобы измеряемые величины оптической плотнос-
6