ГОСТ 31710—2012
8.1 Подготовка образцов
8.1.1 Молоко
pH пробы молока объемом 100 см3 доводят соляной кислотой (см. 5.3) до 3.8.
8.1.2 Продукты на основе молока
Суспензируют 20 г образца и 5 г обезжиренного сухого молока (см. 5.6) в 50 см3воды. pH пробы
доводят соляной кислотой (см. 5.3) до 3,8.
Добавление обезжиренногосухого молока не являетсяобязательным для всехпродуктов наосно
ве молока. При исследовании, например, сухого обезжиренного молока, цельного сухого молока или
казенное его можно недобавлять. Добавление обязательно в случаесухой сыворотки, йогурта, фрукто
вого йогурта ифруктового мороженого. Дляостальныхпродуктовнаоснове молокадобавление обезжи
ренного сухого молока также рекомендуется.
Для испытаниясыра можно использовать альтернативную процедуру. Суспензируют с помощью
блендера 20 гсыра в 100 см3теплой (45 °С) воды. После смешивания pH пробыдоводят соляной кисло
той (6 моль/л)до 4.5. Суспензию переносят в плоскодонную колбуобъемом 750 см3.Добавляютводыдо
конечного объема, в 12.5 раза большего массы сыра. Суспензию встряхивают в течение ночи (16 ч) на
водяной бане при температуре (25 ± 1) °С. Снова доводят pH до 4.5. Суспензию центрифугируют и
фильтруют. Отбирают 100 см3фильтрата и проводят испытание согласно 8.1.3.
Если сухоеобезжиренное молоконедобавляется, суспензируют20 г в40 см3воды. pHпробыдово
дят соляной кислотой (см. 5.3) до 3.8.
8.1.3 Общий ход испытания
8.1.3.1 Центрифугируют (см. 6.3) пробу с частотой вращения от 27000 мин-1 до 34000 мин-1 при
5 °С в течение 20 мин.
8.1.3.2 Супернатант декантируют. Добавляют 0.05 см3 холодной трихлорацетоуксусной кислоты
(см. 5.5) на 1см3пробы и смешивают.
8.1.3.3 Центрифугируют с частотой вращения от 27000 мин-1до 34000 мин 1при 5 °С в течение
20 мин.
8.1.3.4 Осадокрастворяютв 1см3трис-буфера (см. 5.2.1). pHдоводятдо 8.5 спомощью гидрооки
си натрия (см. 5.4). Раствор разводят трис-буфером до 2 см3, перемешивают.
8.1.3.5 Раствор прогревают в кипящей водной бане (см. 6.2) в течение 15 мин.
8.2 Приготовление тест-культуры (положительный контроль)
8.2.1 Тест-культуру (см. 5.8) засеваютв бульон BHI (см. 5.7). Инкубируют 24 ч при (37± 1)°С. Цен
трифугируют (см. 6.4)счастотой вращенияот2800 мин-1до 3500мин 1в течение 15мин. Надосадочную
жидкость декантируют.
8.2.2 Супернатант прогревают на кипящей водяной бане (см. 6.2) в течение 15 мин. Прогретый
супернатант может храниться при температуре 5 °С не болев четырех недель.
При необходимости любой штамм Staphylococcus aureus (например, выделенный из молока или
продуктов на основе молока) может быть исследован на наличие термонуклеазы методом, приведен
ным выше для тест-культуры.
8.3 Приготовление толуидинового синего О-ДНК агара
Цилиндрическим пробойником (см. 6.5)вагаре (см. 5.2.5) прорезаютдвелунки. Агар поверхностью
вниз подсушивают в термостате (см. 6.1) со снятой крышкой и в течение 60 мин при температуре
(37 i 1) °С.
При испытании нескольких образцов в одном агаре прорезают до 10 лунок.
8.4 Определение термонуклеазы
8.4.1 Воднуизлунок вносят 10мм3положительного контроля (см. 8.2.2), в остальные — по 10мм3
проб (см. 8.1.3.5).
8.4.2 Чашки Петри с крышками сверху инкубируют (см. 6.1) 4 ч при температуре (37 ± 1) СС. При
отрицательном результате чашки инкубируютдо 24 ч.
9 Обработка результатов
Розовое гало (ореол или зона свечения) диаметром более 1 мм вокруг лунки свидетельствует о
наличиитермонуклеазы (необходимосравнитьс положительным контролем). Гало любого иного цвета,
кроме розового, не считается признаком термонуклеазной активности.
4