(ПродолжениеИзменения № 1к ГОСТ31506—2012)
Воронка ВФ-3-100. с диаметром пор 80 мкм. ХС по ГОСТ 25336.
Насос водоструйный по ГОСТ 25336.
Холодильник ХШ-1-200-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Ангидрид уксусный по ГОСТ 5815. ч.д.а.
Дигитонин. содержание основного вещества не менее 90 %. понормативным документам, действую
щим на территории государств, принявшихстандарт, спиртовой раствор массовой концентрации 10 г/дм3.
Калия гидроокись по ГОСТ 24363. х.ч.. раствор с массовой долей 40 %.
Эфир диэтиловый. чщ.а., по нормативным документам, действующим на территории государств,
принявших стандарт».
Раздел 7дополнить подразделами 7.2, 7.3:
«7.2 Приготовление раствора калия гидроокиси с массовой долей 40 %
В мерную колбу вместимостью 100 см3помещают (40.000 ± 0,005) г калия гидроокиси, добавляют
небольшое количество дистиллированной воды и аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят
дистиллированной водойдо метки и перемешивают.
Срокхранения раствора в бутыли из темногостекла при температуре (20 ± 5) °С — не более 1мес.
7.3 Приготовление спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 г/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3помещают (1.000 ± 0.005) г дигитонина и растворяют в не
большом количествеэтиловогоректификованного спирта. Объем растворадоводятэтиловым ректифико
ванным спиртом до метки.
Срок хранения раствора в бутыли изтемного стекла при температуре (20 ±5) °С — не более 1мес.».
Раздел 9 изложить в новой редакции (кроме наименования):
«9.1 В коническую колбу вместимостью 500 см3помещают от 100 мг до 15 г жира, выделенного в
соответствии с требованиями раздела 7. добавляют 10 см3 раствора гидроокиси калия с массовой долей
40 % и20 см3этилового спирта.
Присоединяют к колбе воздушный холодильник и нагревают смесь на водяной банедо получения
прозрачного раствора. Затем продолжают нагревание еще 30 мин или 1ч.
9.2 Добавляют 60 см3дистиллированной воды, затем 180 см3этилового спирта, нагреваютсмесь на
водяной банедо40 °С. Добавляют 30см3спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10г/дм3,
перемешивают вращательнымидвижениями иохлаждают при температуре5 °С в течение 12ч.
9.3 Собирают выделившийся дигитонин стерина. пропуская полученный раствор через фильтрую
щую воронку с диаметром пор 80 мкм и фильтровальную бумагу.
Промывают осадок на фильтре водой температурой 5 °Сдо прекращения пенообразования, затем
промывают последовательнос 25—50 см3этилового спирта и с25—50 см3диэтилового эфира.
9.4 Полученный осадок вместе с фильтровальной бумагой помещают в сушильный шкаф и высуши
вают при температуре (102 ±2) °Св течение 10—15 мин. Сухой остатокна фильтре является дижтонином
стерина.
9.5 Вконическую колбу вместимостью 25 см3помещают (100 ± 5) мг дигитонина стерина. добавляют
1смэ уксусного ангидрида, нагревают на глицериновой бане при температуре 130 °С— 145 °С до раство
рения дигитонина, послечего нагревание продолжают еще 2 мин. Затем растворохлаждаютдо 80 °С.
Не используют прямой нагрев раствора, так как возможно разбрызгивание.
9.6 К охлажденному до 80 °С раствору (9.5) добавляют 4 см3этилового спирта, перемешивают,
слегка нагревают для растворения стерил ацетата, который может кристаллизоваться.
9.7 Теплый раствор фильтруютчерез бумажный фильтр средней фильтрации, промывая этиловым
спиртом. Полученный фильтрат постепенно нагревают до слабого кипения. В кипящий раствор аккуратно
по каплям из пипетки с одновременным энергичным встряхиваниемдобавляют 1.0—1.5 см3дистиллиро
ванной воды до такого состояния, пока стерил ацетат не начнет выпадать в осадок, но при этом еще
возвращаясь в раствор (до насыщенного раствора). В образующийся осадокстерил ацетата добавляют
несколько капель этилового спирта. Охлаждают на воздухе 2 ч и затем окончательно в холодной воде 30
мин.
9.8 Выделившийся стерил ацетат фильтруютчерез фильтровальнуюбумагу высокой фильтрации,
применяя фильтрующее устройство (колба Бунзена иворонка Бюхнера) с водоструйным насосом, ипро
мывают кристаллы 1см3этилового спирта (80 %об.).
9.9 Выделившиеся кристаллыдля повторного растворения нагревают с 1см3этилового спирта. Ох
лаждают 15мин на воздухе, затем 5 мин в холодной воде. Выкристаллизовавшийся стерил ацетат филь
труют по9.8.
9.10 Принеобходимости (для лучшей очистки) рекристаллизацию ифильтрациюповторяют 3—4раза.
2