ГОСТ 31643—2012
7 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии
7.1 Условия хроматографического анализа
Колонка аналитическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4.6 мм. заполненная октадецил-
силикагелем. размер частиц 5 мкм (RP 18) по 4.3.
Элюент: раствор дигидрофосфата натрия 0.1 моль/дм3по 4.20.
Температура колонки: комнатная.
Длина волны детектора 243 нм (для спектрофотометра) или диапазон 200 — 350 нм (для фотоди
одной матрицы).
Скорость потока подачи элюента: 0.65 см3/мин (ориентировочное значение).
Объем вводимой пробы: 10 — 20 мкл.
7.2 Условия проведения измерений
Измерения проводят при следующих лабораторных условиях:
температура окружающего воздуха................................(25 ± 5) °С;
атмосферное давление...................................................(97 ± 10) кПа;
относительная влажность................................................(65 ± 15) %:
частота переменного тока............................................... (50 ± 5) Гц;
напряжение в сети............................................................(220 ± 10) В.
7.3 Построение градуировочной зависимости
Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов.
Регистрируют площади ликов аскорбиновой кислоты и строят градуировочный график — зависи
мость площади пика от массовой концентрации или массовой доли аскорбиновой кислоты в градуиро
вочном растворе.
Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством
по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.
Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением
у=кх.
(
1
)
Правильность построения градуировочной зависимости контролируется значением достовернос
ти аппроксимации (R2):
R2z 0.9997.
Из уравнения (1) следует, что площадь пиков стандартных растворов аскорбиновой кислоты S
(mAU с или AU с) и их массовая концентрация с (мг/дм3) или массовая доля с (млн-1) находятся в соот
ветствующей функциональной зависимости
S
к
где А— градуировочный коэффициент. [мг/дм3/тАи cj"1. вычисляемый по формуле
с = —,
(
2
)
,_S(S, с,)
К ~ V^
(
3
)
где S,— площадь пика аскорбиновой кислоты при анализе /-го стандартного раствора:
с,— массовая концентрация или массовая доля аскорбиновой кислоты при анализе /-го стандар
тного раствора, мг/дм3(млн-1).
Градуировочную зависимость строят при замене оборудования, колонок, реактивов, условий хро
матографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям резуль
татов оперативного контроля или внутреннего аудита.
7.4 Анализ проб
Проводят хроматографический анализ проб, подготовленных по 6.2. Каждую пробу анализируют
два раза о условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 и
ГОСТ ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пиков аскорбиновой кислоты. В случав если массовая кон-
5