ГОСТ 31488—2012
Одновременно готовят контрольную пробу на реактивы. Для этого в пробирку вносят 1см3ацетат
ного буферного раствора по 4.3.1. добавляют 1 см3дистиллированной воды и 3 см3реактива ДНС по
4.3.3.
Все пробирки помещаютв кипящую водяную баню икипятят в течение 5 минсточностью, измеряе
мой посекундомеру. Пробиркиохлаждаютдокомнатнойтемпературы иизмеряютоптические плотности
растворовнафотоэлектроколориметре или спектрофотометре придлине волны 540 нм в кюветахстол
щиной поглощающего светслоя 10 мм. против контрольной пробы на реактивы.
Пополученным значениям строятградуировочный графикоптической плотности (поглощения)как
функции от молярной концентрации ксилозы (мкмоль/см3). Рабочая зона градуировочного графика
лежит в пределах от 0,15до 0.65 единиц оптической плотности (ед. ОП).
Для построения каждойточки градуировочного графикавычисляютсреднеарифметическоезначе
ние оптической плотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строятдля каждой новой партии реактивов, а также при замене прибора.
4.4 Отбор и подготовка проб
4.4.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 20264.0.
Анализируемые образцы в форме порошка или микрокапсулированные можно использовать без
предварительной подготовки. Анализируемыеобразцы вформе гранул следуетизмельчать(например,
в механической мельнице или фарфоровой ступке) и просеивать через сито сдиаметром отверстий не
более 1мм.
4.4.2 Для приготовления основного раствора анализируемого образца в плоскодонную стеклян
ную колбу помещают навеску анализируемогообразца массойот 0.1 до 10 г*сточностью до 0.2 мги сус
пендируют в небольшом количестве дистиллированной воды (до 50 см3) на магнитной мешалке в
течение 15 мин (порошок, микрогранулы, микрокапсулы) или 60 мин (корма, смеси кормовые).
Суспен зию количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем
дистиллирован ной водой до метки. Полученнуюсуспензию центрифугируютпри частоте вращения
7000мин*1в течение 15 мин. Для анализа используют надосадочную жидкость.
4.4.3 Рабочий растворанализируемогообразца готовятизосновного раствора по4.4.2 путем раз
ведения его в дистиллированной воде таким образом, чтобы при определении активности оптические
плотности опытных и контрольного растворов находились в пределах рабочей зоны градуировочного
графика.
Рабочий раствордолжен содержатьот 0.5до 5.0 единиц активности в 1см3.
Раствор готовят вдень определения.
4.5 Проведение анализа
4.5.1 Втри пробирки (двеопытные иоднуконтрольную)вносят по1см3субстрата ксилана по4.3.4.
Пробирки закрываютпробками, помещаютвультратермостатстемпературой (50±1) °С ивыдерживают
в течение 5 мин.
4.5.2 Вдве опытные пробиркидобавляют по 1см3 рабочего раствора анализируемого образца по
4.4.3, предварительно прогретого при температуре 50 °С, и тщательно перемешивают. Три пробирки
(две опытные и одну контрольную) помещают в ультратермостат с температурой (50 i 1) °С на 10 мин (с
точностью, определяемой по секундомеру).
4.5.3 В контрольную пробирку вносят 1см3 рабочего раствора анализируемого образца по 4.4.3.
В три пробирки (двеопытные иодну контрольную)добавляютпо 3 см3реактиваДНС по4.3.3 итщатель
но перемешивают.
4.5.4 Все три пробирки помещают в кипящую водяную баню на 5 мин (с точностью, определяемой
по секундомеру).
4.5.5 Пробирки (две опытные и одну контрольную) охлаждаютдо комнатной температуры иколо-
риметрируютсодержимое нафотоэлектроколориметреили спектрофотометрепри длине волны 540 нм,
в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10мм. против контрольной пробы на реактивы.
Если значенияоптических плотностейопытныхпроб находятсяза пределами рабочей зоны граду
ировочного графика, определение активности следует повторить с раствором, имеющим большее или
меньшее содержаниефермента.
* В зависимости от предполагаемой активности.
5