ГОСТ 31488—2012
5.1.5Ферментативную активность исследуемого образца определяют по градуировочному гра
фику, построенному для образца ксиланазы с известной ферментативной активностью, и выражают в
единицах КсА по4.1.2.
5.2 Сродства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы
5.2.1 Дляопределенияферментативнойактивностиксиланазысокрашенным субстратом исполь
зуют средства измерений и оборудование по4.2.1, атакже:
- прибортипа вортекс или аналогичный, со скоростью встряхивания от 500 до 2500 мин-1;
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр (СФ)любого типа, которые обеспечивают
измерения при длине волны 490 нм, с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1
% (не более 0,01 единицы оптической плотности).
5.2.2 Дляопределенияферментативнойактивностиксиланазысокращенным субстратом исполь
зуютлабораторную посуду и материалы по4.2.2, реактивы по4.2.3, а также:
- азоксилан;
- ксиланазу (внутренний стандарт) с известной ферментативной активностью, определенной в
разделе4;
- спиртэтиловый 96% по ГОСТ 5962.
5.2.3. Все реактивыдолжны относиться к подгруппечистоты 2 (х.ч.) или 3 (ч.д.а.) по ГОСТ 13867.
5.2.4Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с
метрологическими характеристиками, а также реактивов, по качеству не нижеуказанных.
5.3Подготовка канализу
5.3.1 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0,1 моль/дм3,
pH 4,7 проводят в соответствии с 4.3.1.
5.3.2 Для приготовления раствора окрашенного субстрата в коническую колбу вместимостью
200см3вносят 1,0г азоксилана. добавляют40 см3дистиллированнойводы. Колбу помещают на магнит
ную мешалкус обогревом, доводятдо кипения и кипятят 2 мин. Затем уменьшают температуру нагрева
до 50 °С — 70 °С и раствор выдерживаютна магнитной мешалке еще 10 мим.
Колбус растворомохлаждаютдо комнатнойтемпературы 20°С — 25°С. Затем растворпереносят
в мерную колбу вместимостью 50 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемеши
вают.
Срокхранения при температуре 5 °С — 2 нед.
5.3.3 Для приготовления основного стандартного раствора ксиланазы а мерную колбу вмести
мостью 50 см3помещают навеску ксиланазы. взвешенную с точностью до 0.0001 г, с известной актив
ностью (например. 1.0000 г ксиланазы с активностью 900 ед./r). растворяют в небольшом количестве
ацетатного буферного раствора по4.3.1. тщательно перемешивают идоводят объем до метки.
В мерную колбувместимостью 50 см3 вносят 2 см3полученного раствора, доводятдо метки ацетат
ным буферным раствором по4.3.1 иперемешивают.
5.3.4 Для приготовления рабочих стандартных растворов ксиланазы из основного стандартного
раствора ксиланазы по5.3.3 готовятсерию разведений в соответствии с таблицей 2.
Т а б л и ц а 2
Объем основного стандартного раствора
ксиланазы, например с активностью
0.72 ед-.’см3 см1
Объем буферного раствора,
см
3
Активность разведения стандартного
раствора ксиланазы, ед.|’см3
1.0
9.0
0,072
2.5
7.5
0,180
4.0
6.0
0,285
5.0
5.0
0,360
6.5
3.5
0,468
8.0
2.0
0,576
10,0
0.0
0,720
Рабочие стандартные растворы ксиланазы готовят в день построения градуировочного графика,
при этом берутпотри параллельныхразведениядля приготовлениякаждойконцентрации раствора кси
ланазы.
7