ГОСТ 31480—2012
вочмых точек проводят в том случае, если отклонение площади пика и одновременно времени выхода
пика триптофана превышает 5 % средних значений.
Следует обращать внимание на правильность автоматической разметки начала и конца пика трип
тофана и при необходимости дополнительно пользоваться ручной разметкой.
7.2.10.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контрольстабильности градуировочной характеристикипроводят непосредственно перед измере
ниями испытуемых растворов путем записи электрофореграммы градуировочного раствора (см.
7.2.8.3).
Градуировку признают стабильной, если отклонение найденной массовой концентрации от задан
ного значения не превышает 5 %. В противном случае анализируют градуировочный раствор еще два
раза. При повторных отклонениях, превышающих указанные нормативы хотя бы один раз, градуировку
системы проводят заново, начиная с приготовления нового запасного раствора (см. 7.2.8.1).
7.3 Проведение испытания
7.3.1 Проведение гидролиза и получение испытуемого раствора
Навеску исследуемого продукта массой 0.1000 гпомещают в стеклянную виалу или ампулу с пере
тяжкой (см. 6.3.1), добавляют 5 см3раствора гидроокиси бария (см. 7.2.3). Виалу с плотно завинченной
крышкой или запаянную ампулу помещают в эксикатор, который ставят в сушильный шкаф на 14— 16 ч
при температуре 110 °С (оставляют на ночь).
Поокончании гидролиза горячий гидролизат из виалы или ампулы количественно переносят в мер
ную колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно помещено 40—50 см3дистиллированной
воды, добавляют 1—3 капли индикатора метилового красного (см. 7.2.5) и нейтрализуют раствор, доба
вив сначала 3.5 см3раствора серной кислоты (см. 7.2.4), а затом добавляют раствор серной кислоты по
каплямдо перехода окраски из желтой в розовую. Затем доводятобъем растворадо метки дистиллиро
ванной водой, перемешивают, оставляют на 10—15 мин до просветления раствора над осадком сульфа
та бария. 1.0 см3полученного раствора помещают в пробирку Эппсндорфа, центрифугируют 2—3 мин
при 6000 об/мин. после чего 0.5 см3раствора переносят в сухую пробирку Эппендорфа и используют
для анализа (испытуемый раствор).
7.3.2 Анализ испытуемого раствора
Для каждой пробы записывают не менее двух электрофореграмм. Параметры ввода ианализа ис
пытуемого раствора — по 7.2.10.1,7.2.10.2. По окончании анализа проверяют правильность идентифи
кации и разметки пиков, после чего формируют отчет с указанием метода расчета «Заказной».
П р и м е ч а н и е — На электрофореграмме пробы могут наблюдаться пики, соответствующие другим ами
нокислотам. в частности метионину, поведение которого а рамках данной методики не рассматривается, поскольку
известно, что происходит частичная потеря этой аминокислоты при щелочном гидролизе. Показано отсутствие ме
шающего влияния сопутствующих аминокислот количественному определению триптофана.
7.4 Обработка результатов
7.4.1 Массовую долю триптофана X. %. вычисляют по формуле
Х = СЧкар 100.(3)
т
где С — массовая концентрация триптофана в испытуемом растворе, измеренная по 7.3.2. мг/дм3;
Угидр — объем испытуемого раствора, 0,1 дм3;
т — масса навески, 100 мг.
100 — коэффициент пересчета в проценты.
7.4.2 Вычисления выполняют с точностью до третьегодесятичного знака с последующим округле
нием результатов до второго десятичного знака.
7.5 Оформление результатов
При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навес
ки испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превыша
ет допустимое |Х, - Х2|i 0,01гХ,где X,,Х2,X — результат первого и второго параллельных определений
и их среднеарифметическое значение соответственно, то среднеарифметическое значение принимают
за результат анализа. В противном случае получают еще два результата определений и вычисляют
окончательный результат анализа пробы по [1].
Значения повторяемости г и воспроизводимости R приведены в таблице 5.
и