ГОСТ 31662—2012
Т а б л и ц а 2
Объем стандартного раствора с молярной
(массовой) концентрацией глюкозы
1мкмоль/см’3 (180 мкт^см3).см3
Объем буферного
раствора, см3
Концентрация глюкозы в разведении
массовая, мкг/см3молярная, мкмолы’см3
28360.20
37540.30
46720.40
55900.50
6
4
1080.60
73 1260.70
821440.80
4.3.7 Стандартныерастворы глюкозы готовятвденьпостроения градуировочногографика из трех
параллельных навесок.
4.3.8 Для построения градуировочного графика с реактивомДНС в пробирки вносятпо 1см3стан
дартного раствора глюкозы, приготовленных по4.3.5. различной концентрации в соответствии с табли
цей 1.1.0 см3дистиллированной воды, 3.0 см3реактива ДНС и быстро перемешивают. Одновременно
готовят контрольную пробу на реактивы. Для этого в пробирку вносят 1см3 ацетатного буферного рас
твора по4.3.1. добавляют 1см3дистиллированной воды иЗсм3 реактиваДНС по4.3.3.
Пробирки помещают в кипящую водяную баню икипятят втечение 5минс точностью, измеряемой
по секундомеру. Пробирки охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность
растворовна ФЭКили СФпри длине волны 540 нм в кюветах столщиной поглощающегосветслоя 10мм,
против контрольной пробы на реактивы.
По полученным данным строят градуировочный график оптической плотности (поглощения) как
функции от концентрации глюкозы (мкмоль/см3). По оси абсцисс откладывают молярные концентрации
глюкозы мкмоль/см3, по оси ординат — оптические плотности в единицахоптической плотности (ед. ОП).
Рабочая зона градуировочного графика лежит в пределахоптической плотностиот 0.15 до 0.65 ед. ОП.
Для построениякаждойточки градуировочного графикавычисляютсреднеарифметическоезначе
ние оптическойплотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строят для каждой новой партии реактива ДНС. а также при замене при
бора.
4.3.9 Для построения градуировочного графика с железосинеродистым калием вносят в серию
пробирок по 2 см3разведений стандартного раствора глюкозы, приготовленных по 4.3.6. и добавляют 6
см3раствора гексацианоферрата калия. Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 10 мин,
затемвынимаютиохлаждаютдо комнатнойтемпературы. Измеряют оптическуюплотностьокрашенных
растворов при длине волны от400 до 440 нм итолщине поглощающего слоя 10 мм противдистиллиро
ванной воды.
На основании полученных результатов строят градуировочный график зависимости значений
оптической плотности от концентрации глюкозы (мкмоль/ см3). По оси абсцисс откладывают молярные
концентрации глюкозы мкмоль/ см3, по оси ординат — оптические плотности в единицах ОП. График
имеетобратную линейную зависимость. Рабочаязонаградуировочногографикалежитвпределахот0.3
до 0.6 мкмоль/см3 глюкозы, что соответствует поглощению в единицах оптической плотности от 0.50до
0,65 ед. ОП.
Для построениякаждойточки градуировочного графикавычисляютсреднеарифметическоезначе
ние оптической плотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строятдля каждой новой партии реактивов, а также при замене прибора.
4.3.10 Для приготовленияраствораферментногопрепаратаотбираютобразецпоГОСТ20264.0.
Анализируемые образцы в форме порошка или микрокапсулированные можно использовать без
предварительной подготовки. Анализируемыеобразцы вформе гранул следуетизмельчать (например,
в механической мельнице или фарфоровой ступке) и просеивать через сито сдиаметром отверстий не
более 1мм.
5