ГОСТ 31662—2012
5.2Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
5.2.1 Для определения ферментативной активности цвллюлазы с использованием субстрата
Na-КМЦ применяютсредства измерений, вспомогательноеоборудование и реактивы, которые указаны
в4.2.1—4.2.3. за исключениемхроматографическойбумаги, вместокоторойприменяют Na-КМЦ(содер
жание основного вещества не менее 96 %).
5.2.2 Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с
метрологическимиитехническимихарактеристиками, а такжереактивовпокачествуне нижеуказанных.
5.3Подготовка канализу
5.3.1 Приготовление ацетатного буферного растворасмолярнойконцентрацией0,1 моль/дм3при
pH 4.7.осуществляют в соответствии с 4.3.1.
5.3.2 Приготовление раствора натрия гидроокиси с массовой долей 10,7 % осуществляют в соот
ветствии с4.3.2.
5.3.3 Приготовление реактиваДНС с массовойдолей 1.0 % осуществляют в соответствии с4.3.3.
5.3.4 Приготовление стандартного раствора глюкозы с молярной (массовой) концентрацией
5 мкмоль/см3(900 мкг/см3) и серии разведений стандартного раствора осуществляют в соответствии
с 4.3.5.
5.3.5 Градуировочный график соответствия концентраций глюкозы оптическим плотностям в
реакции сДНС-реактивом строят, как указано в4.3.8.
5.3.6 Для приготовления субстрата, раствора Na-КМЦ массовой долей 1 %. в коническую колбу
вместимостью 100 см3наливают около 70см3буферного раствора, помещаютее на магнитную мешалку и
при включенной мешалке вносят 1,0 г Na-КМЦ. Перемешивание продолжают не менее 40 минут при
комнатной температуредо полученияоднородного коллоидного раствора. Далее субстрат переносят в
мерную колбу вместимостью 100 см3идоводятобъем до метки буферным раствором.
Субстрат готовят вдень проведения анализа.
5.3.7 Приготовление основного и рабочего растворов ферментного препарата осуществляют в
соответствии с4.3.9.
5.4 Проведение анализа
5.4.1 Анализ проводят вдвух параллельных определениях.
5.4.2 В три пробирки (две опытные и одну контрольную) вносят по 1см3 субстрата, закрывают их
пробками и термостатируют при (50 ± 1) °С в течение 5 минут.
5.4.3 Вдве опытные пробирки вносятпо 1см3 рабочего раствора ферментного препарата. Содер
жимое пробироктщательно перемешивают.
5.4.4 Все три пробирки выдерживают при температуре (50i 1) “Св течение 10 минут(с точностью,
определяемой по секундомеру).
5.4.5 После проведения гидролиза в две опытные пробирки вносят по 3 см3 реактива ДНС.
В третью пробирку (контрольную) добавляют 3см3реактива ДНС и 1см3рабочего раствора препарата.
Смеси тщательно перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 5мин (с точностью, опреде
ляемой по секундомеру), послечего охлаждаютдо комнатной температуры.
5.4.6 Измеряютоптические плотностиопытныхи контрольной пробна ФЭК илиСФ при длине вол
ны 540нмв кюветах столщиной поглощающегосветслоя 10мм противконтрольнойпробы на реактивы.
5.4.7 Если значения оптическихплотностей опытных проб находятся за пределами рабочей зоны
градуировочного графика, то определение активности повторяют с раствором, имеющим большее или
меньшеесодержание фермента.
5.5 Обработка результатов
5.5.1 Молярную концентрацию глюкозы (в мкмоль/см3)в опытных и контрольном растворах опре
деляют по градуировочному графику.
5.5.2 Целлюлолитическую активность КМЦлА, ед/г, в ферментном препарате вычисляют по фор
муле
КМЦлА = С°~С\(6)
tc
где С0— молярная концентрация глюкозы вопытной пробе, найденная по градуировочному графику.
мкмоль/см3;
С, — молярнаяконцентрацияглюкозы в контрольнойпробе, найденная по градуировочному графи
ку, мкмоль/см3;
8