ГОСТ Р 53853—2010
5.4.4 Приготовление водного раствора этилового спирта объемной долей 70 % (спирт эти
ловый 70 %-ный)
Смешивают 729 см3этилового спирта объемной долей 96 % с 297 см3дистиллированной воды.
Хранят в емкости с плотно закрывающейся крышкой.
5.4.5 Приготовление спиртового раствора метиленового синего массовой долей 1 %
1 г метиленового синего растворяют в 100 см3этилового спирта объемной долей 70 %.
5.4.6 Приготовление спиртового раствора эозина с массовой долей 1 %
1 г спирторастворимого эозина растворяют в 100 см3этилового спирта с массовой долей 70 %.
5.4.7 Приготовление водного раствора метиленового синего с бурой
2 г буры и 1 г метиленового синего растворяют в 100 см3 подогретой дистиллированной воды.
Раствору дают один раз вскипеть иоставляют надлительное время (месяц и больше)для созревания.
5.4.8 Приготовление смеси для окрашивания срезов
Смесь составляют из трех растворов: раствор 1 — спиртовый раствор метиленового синего с
массовой долей 1 % (см. 5.4.5); раствор 2 — спиртовый раствор эозина с массовой долей 1 % (см.
5.4.6); раствор 3 — водный раствор метиленового синего с бурой (см. 5.4.7).
Смешивают равные объемы растворов 1 и 2 (по 10—15 капель каждого) и 5— 10 капель раство
ра 3 идобавляютдистиллированную воду вдвукратном отношении к общемуобъему трехрастворов.
Смесь готовят непосредственно перед употреблением.
5.4.9 Подготовка проб к анализу
5.4.9.1 Из отобранных по 5.3 проб вырезают вторичные точечные пробы мышечной ткани пло
щадью не менее 1см2на всю глубину мышцы, почки илегких. Места взятия проб предварительно обра
батывают 96 %-ным этиловым спиртом. Точечные пробы вырезают из мест, наиболее быстро
подвергающихся порче, в частности, при исследовании тушек птицы:
- из внутренних брюшных мест мышц:
- из мышц в области шейного зареза:
- из почек и легких при наличии их в тушках;
- из любых других участков тушки, сомнительных по свежести.
5.4.9.2 К каждой пробе со стороны, противоположной наружной поверхности, прикрепляют с
помощью иголки и нитки этикетку из плотной белой бумаги, на которой графитным карандашом указы
вают номер пробы и дату ее взятия. Пробы помещаютвместе с этикетками в колбу, заливают 10 %-ным
раствором формалина, взятым в десятикратном объеме, и плотно укупоривают.
5.4.10 Приготовление гистологических препаратов
5.4.10.1 Колбу с пробами, залитыми десятикратным объемом 10 %-ного раствора формалина
(см. 5.4.3), подогревают в вытяжном шкафу до появления пузырьков воздуха. Содержимое слегка
встряхивают и вновь подогревают до появления пузырьков. Эту операцию повторяют три раза.
5.4.10.2 Формалин сливают, в колбу вставляют стеклянную воронку и промывают пробы холод
ной проточной водой в течение 5—7 мин.
5.4.10.3 Промытые пробы помещают на столик замораживающего микротома и ориентируют его
так. чтобы в срез попадали все слои пробы по глубине, а мышечные волокна посвоей длине располага
лись параллельно лезвию ножа. Срезы готовят толщиной 15—30 мкм. Почки и легкие ориентируют
только по глубине.
5.4.10.4 Срезы осторожно снимают кисточкой слезвия ножа ипомещают в чашку Петри с дистил
лированной водой на несколько секунддля распрямления. Под неповрежденные срезы подводятпред
метное стекло, предварительно покрытое смесью белка яйца с глицерином (см. 5.4.2), поочередно
извлекают срезы из воды с помощью препаровальной иглы и расправляют их на предметном стекле.
Выровненные срезы аккуратно накрывают сложенной в три слоя фильтровальной бумагой и, нажимая
пальцами, приклеивают их к предметному стеклу.
Предметные стекла со срезами помещают в чашку Петри.
С микротомного ножа с помощью тонкой кисточки срезы переносят на охлажденное в криостате
предметное стекло. Под стекло в области среза подводят палец, подогревают стекло, расплавляют и
приклеивают срез. При работе с замораживающим столиком срез переносят в чашку Петри на воду.
Срез после расправления извлекают из воды на середину стекла, удерживая его в верхней части пре
паровальной иглой. Затем срез накрывают сухой фильтровальной бумагой и. легко прижимая бумагу
ребром ладони, наклеивают его на предметное стекло. После того как фильтровальную бумагу
убирают, срез не должен быть поврежденным.
5.4.10.5 Наклеенные срезы окрашивают смесью метиленового синего с эозином (см. 5.4.7). Кра
сящую смесь набирают в пипетку и наносят ровным слоем на срезы, находящиеся на предметном стек
ле. Через 20—30 мин срезы промывают дистиллированной водой из пипетки.
5