ГОСТ Р 53601—2009
6.3.5.2 Приготовление растворадемеклоциклина (внутреннего стандарта)
Для приготовления раствора внутреннего стандарта на весахс наибольшим пределом взвешива
ния 500 г взвешивают 10 мг стандарта демеклоциклина гидрохлорида и переносят в мерную пробирку
вместимостью 10 см3.Добавляют метанол, помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. доводят полу
ченный раствордо метки метанолом.
Массовая концентрация внутреннего стандарта в растворесоставляет 1мг/см3.Путем нескольких
разбавлений доводят массовую концентрацию раствора внутреннего стандарта до значения 1 мкг/см3.
Растворс данной концентрацией используютдля внесения в исследуемые образцы.
Срокхранения раствора — 3мес при температуре минус20 °С.
Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре, в темном месте, не
менее20 мин.
6.4 Хроматографические условия измерений
6.4.1 Хромато-масс-спектрометрвключают инастраиваютв соответствиис техническим руковод
ством по егоэксплуатации иустанавливаютследующие хроматографические параметры:
- скорость потока элюента — 200 мм3/мин;
- объем вводимой пробы — 20мм3.
6.4.2 Детектирование пиков проводится методом «регистрации выбранных реакций»1». Для каж
дого антибиотика тетрациклиновой группы измеряется сигнал для двух фрагментных ионов согласно
таблице 1.
Т а б л и ц а 1— Значения масс ионов-предшественников и ионов-фрагментов
Антибиотик тетрациклиновой группы
Ион-предшсствсмник. т/х*
Иоиы-фрагмеиты, т/х*
Тетрациклин
445.1
410.0
427.1
Окситетрациклин
461,1
426.1
444.2
Доксициклин
445,1
428.0
410.0
Хлортетрациклин
479.1
444.1
462.1
Демеклоциклин
465.1
448.1
430.1
* т/г — отношение массы иона к его заряду.
Более интенсивный пик (верхний в каждой строке таблицы 1)служитдля определения концентра
ции антибиотика, второй(нижний вкаждойстрокетаблицы 1)используетсядля подтвержденияправиль
ности определения. Пики ионов-фрагментовс массой 410.1 тетрациклина идоксициклина различаются
по времени их удержания в хроматографической колонке, определяемому на стадии разработки
ВЭЖХ-МС/МС метода.
6.5 Построение градуировочной характеристики
6.5.1 Градуировочную кривую строят при помощи матричной градуировки. Для этого проводят
обработку «чистых» проб, приготовленных и проанализированных ранее в соответствии с требования
ми раздела 7. несодержащихтетрациклинов более 1мкг/кгдля каждого изантибиотиков, взависимости от
типа исследуемой матрицы. На стадии перерастворения перед введением в хроматограф в мерную
пробирку вместимостью 5 см3,содержащую исследуемую «чистую» пробу, добавляют градуировочный
раствортетрациклиновпо6.3.5.1 стаким расчетом, чтобыокончательные массовые концентрациинахо
дились в пределах от 1 до 1000 нг/см3. Затем добавляют 50 мм3раствора внутреннего стандарта по
6.3.5.2 и необходимое количество мобильнойфазы А по6.3.4.1. доводя объем до 1см3.
6.5.2 Для получения градуировочных данных используют не менее четырех уровней концентра
ций матричных градуировочных растворов.
’’ «Регистрация выбранных реакций» — режим работы ыасс-спеткрометра. при котором детектируется ион
ный ток только для выбранных фрагментных ионов выбранных ионов-прекурсоров.
5