ГОСТ Р 53601—2009
6.5.3 При построении градуировочной зависимости для количественного определения тетрацик-
линованализируютматричныеградуировочныерастворы различныхуровней концентраций вусловиях,
описанныхв6.2 и6.4. Затем строятграфикизависимости массовойконцентрацииантибиотикатетрацик-
линовой группы от отношения площади хроматографического пика антибиотика тетрациклиновой груп
пы к площади пика внутреннего стандарта для каждого фрагментного иона четырех антибиотиков
тетрациклиновой группы. Образец графика приведен в приложении Б.
Построение графиков может проводиться при помощи программы обработки данных
ВЭЖХ-МС/МС или при помощи программы Excel (Microsoft Office).
6.5.4 Расчетныеконцентрациидляобоихфрагментных ионовкаждогоантибиотикатетрациклино
вой группы должны совпадать в пределах20 %.
Градуировочнаязависимостьсчитаетсяприемлемой, еслирассчитанное значение квадрата коэф
фициентакорреляциидляградуировочной кривой каждогофрагментного иона каждогоантибиотика тет
рациклиновой группы не менее 0.98.
6.6 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.6.1 Мойку и сушку посуды следует проводить в отдельном помещении, оборудованном приточ
но-вытяжной вентиляцией. Не допускается проведение подготовки посуды в данном помещении для
других видов анализов. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо
использо ватьотдельные сушильные шкафы.
6.6.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с
последующей последовательной промывкойорганическими растворителями: этилацетатом (однократ
но). ацетоном (дважды).
6.6.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шка
фу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку
посуды проводятв сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105®Сдо
110°С.
7 Порядок выполнения измерений
7.1 Обработка проб органов, тканей животных, яиц, яичного порошка, молока, молочных
продуктов и меда
7.1.1 Мышечнуюткань продварительмоочищаютотгрубойсоединительнойткани. Яйцаотделяют
от скорлупы. Каждую пробу измельчают на гомогенизаторе и взвешивают по 1.0 г гомогенизированной
пробы в виале на лабораторных весах с наибольшим пределом взвешивания 200 г. В виалудобавляют
50 мм3 раствора внутреннего стандарта по 6.3.6.2 и оставляютдля уравновешивания на 15 мин. Затем
добавляют 10см3экстракционного буферного растворапо6.3.3, закрываюткрышкойи интенсивнопере
мешивают на встряхивателев течение 15 мин.Далее виалы собразцами помещаютна предварительно
охлажденную до 4 °С центрифугу и центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин. Процедуру экс
тракции и центрифугирования повторяют еще один раз. Объединенные экстракты собирают в чистые
виалы.
7.1.2 1.0 гмеда взвешиваютна лабораторныхвесахс наибольшим пределом взвешивания200 г в
виале вместимостью 50 см3. В виалу добавляют 50 мм3раствора внутреннего стандарта no 6.3.6.2 и
оставляют для уравновешивания на 15 мин. Затем добавляют 20 см3экстракционного буферного рас
твора по 6.3.3. закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 1 мин.
Далее виалы с образцами помещают на предварительно охлажденнуюдо 4 вС центрифугу и центрифу
гируют при 4000 об/мин втечение 20 мин.
7.2 Проведение твердофазной экстракции и подготовка кхроматографированию
7.2.1 Для проведения твердофазной экстракции картридж для ТФЭ заполняют 0.5 г сорбента.
Предварительно картриджкондиционируют6 см3метилового спирта иуравновешивают6 см3бидистил-
лированнойводы. Затем наносятобъединенныйэкстрактивновьпромывают6см3бидистиллированной
воды. Тетрациклины элюируютссорбентапри помощи6 см3мобильнойфазы Б. Полученныйэлюат упа
риваютна нагревательном модуле в токе воздухадо 0.5 см3при температуре40*С.
7.2.2 Для перерастворения и подготовки к хроматографированию объем полученногоупаренного
элюата в мернойпробиркевместимостью 10см3доводятдо 1см3при помощи мобильнойфазыА ипоме
щают на ультразвуковую баню на 1мин. Полученный экстракт фильтруют через мембранный фильтр и
используютдля ВЭЖХ-МС/МС анализа.
6