ГОСТ Р 53761—2009
образовавшийся осадок фильтруют через сухой складчатый фильтр и высушивают в эксикаторе над без
водным хлористым кальцием не менее 4 ч.
Срокхранения сывороточных белков при температуре {4 ± 2) °С — не более 2-х недель.
7.3 Подготовка исследуемых проб молока
Отделение жира и выделение белков исследуемых проб молока осуществляется по 7.2.1 и 7.2.2.
7.4 Приготовление растворов белков
7.4.1 Приготовление контрольных растворов белков
В микроцентрифужную пробирку типа «Эппендорф» вместимостью 1.5см3помещают (0.0040± 0.0003)г
белка, выделенного по 7.2.7.3, добавляют 0.5 см3раствора карбамида, приготовленного по 7.1.2. выдер
живают в термостате при температуре 95 °С в течение 5 мин. тщательно перемешивают на аппарате для
встряхивания типа «Вортекс» до полного растворения белков. К полученному растворудобавляют 0.2 см3
глицерина и 0.025 см5лидирующего красителя, приготовленного no 7.1.3. тщательно перемешивают на
аппарате для встряхивания типа «Вортекс», центрифугируют при частоте 3000 об/мин в течение 5 мин,
образовавшийся осадок отбрасывают, а иадосадочную жидкость используютдля анализа.
Срок хранения растворов белков при температуре (4 ± 2) °С — не более семи суток.
7.4.2 Приготовление исследуемых растворов белков
Приготовление исследуемых растворов белков осуществляется по 7.4.1.
8 Условия проведения анализа
При выполнении анализа должны соблюдаться следующие условия:
- температура окружающего воздуха.................(20 ± 5) X
- относительная влажность воздуха.................от 30 % до 80 %
- атмосферное давление......................................от 84 до 106 кПа
- напряжение в се ти ..............................................(220 ± 10) В
- частота переменного тока.................................. (50 ± 2) Гц
9 Проведение анализа
При сборке камеры для полимеризации геля используют стеклянные пластины размером: внутрен
няя — (200 х 200) мм и внешняя — (200 х 225) мм.
На внешнюю пластину справа и слева вдоль длинных сторон помещают спенсеры (пластинки) тол
щиной 1мм. Поверх спейсеров накладывают внутреннюю стеклянную пластину. Пластины фиксируют за
жимами справа и слева и устанавливают на подставкудля заливки с желобом для выравнивания. Камеру
проверяют на герметичность с помощьюдистиллированной воды, которую затем удаляют. После проверки
камеры на герметичность между пластинами камеры под небольшим углом помещают гребенкудля фор
мирования лунок.
Для обеспечения нормального процесса полимеризации геля раствор мономеров, приготовленный
по 7.1.5. подвергают деаэрации в колбе с тубусом, присоединенной к водоструйному насосу. После деа
эрации в раствордобавляют (0,0180 ± 0.0003) г аммония иадсернокислого и 0.018 см3 N. N. N’, N -тетраме-
тилэтилемдиамина. осторожно перемешиваютдля предотвращения образования пузырей в растворе. Стек
лянной пипеткой с грушей вдоль края слейсера (с приподнятой стороны гребенки) раствор вносят
вкамору для полимеризации.
Гель полимеризуется в течение 45 мин. после чего гребенку извлекают и ополаскивают образовавши
еся в геле лунки дистиллированной водой.
Камеру с гелем прикрепляют к термостатируемой части и помещают в электрофоретическую ячейку.
В электродные камеры ячейки заливают электродный буфер, приготовленный по 7.1.6.
В лунки геля подэлектродный буфер с помощью микрошприца вносят контрольные и исследуемые
растворы белков, приготовленные по 7.4. Крайние лунки геля рекомендуется использоватьдля контрольных
растворов белков. Количество раствора, вносимого в одну лунку, составляет (0,020—0.025) см3. После
каждого внесения микрошприц тщательно промывают раствором электродного буфера.
Для получения достоверных результатов рекомендуется каждый исследуемый раствор белка вно
сить не менее чем в трех повторностях.
После внесения контрольных и исследуемых растворов электрофоретическую ячейку закрывают крыш
кой.
6