ГОСТ Р 53761—2009
7.1.6 Раствор электродного буфера
В мерную колбу вместимостью 500 см3вносят (4.50 ± 0,01) г трис-(л-дрооксиметил) аминометана,
(21.60± 0.01)г аминоухсусной кислоты и растворяют в 300 см3дистиллированной воды, полученный объем
доводятдо метки, переливают в коническую колбу вместимостью 2000 см3и добавляют 1000 см3дистил
лированной воды.
Срок хранения раствора в стеклянной колбе с притертой пробкой при температуре (4 ± 2) °С — 1мес.
П р и м е ч а н и е — Количество электродного буфера одного анализа данодля одной электрофоретической
ячейки с параметрами, указанными в разделе 5. При использовании электрофоретической ячейки другого типа
количество электродного буфера должно быть соответственно скорректировано.
7.1.7 Раствор для окрашивания геля
В коническую колбу вместимостью 500 см3вносят (0,50 ± 0.01) г кумасси бриллиантового голубого,
добавляют 200 см3этилового спирта. 50 см3кислоты уксусной ледяной и 250 см3дистиллированной воды.
Содержимое колбы тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в стеклянной колбе с притертой пробкой при температуре (4 ± 2) 9С — 1мес.
7.2 Подготовка контрольных проб
Для приготовления контрольных проб используют сырое молоко по ГОСТ Р 52054 и [1]с кислотностью
(16.0—20.0)
СТ
без содержания консервантов и ингибирующих веществ.
7.2.1 Отделение жира
7.2.1.1 Метод сепарирования
(0.4—0.5)дм3молока передсепарированием подогревают наводянойбанедо температуры (40—45) °С.
Через 1—2 мин после включения электропривода сепаратора для прогрева молочного тракта через
электросепаратор пропускают 1дм3дистиллированной воды, нагретой до температуры (40—50) °С. Далее,
не выключая электроприводсепаратора, заливают предварительно подогретое молоко и сепарируют. Пос
ле сепарирования обезжиренное молоко используют длядальнейшего анализа.
7.2.1.2 Метод центрифугирования
(0,4—0.5) дм3 молока помещают в центрифужные пробирки или стаканы и центрифугируют при
5000 об/мин в течение (20—30) мин. После центрифугирования центрифужные пробирки (стаканы) поме
щают вхолодильник и охлаждают при температуре (4± 2)СС. После полногоохлаждения застывший верхний
жировой слой удаляют, а оставшееся обезжиренное молоко используют для дальнейшего анализа.
7.2.2 Выделение белков
В химический стакан вместимостью 250 см3вносят 50 см3предварительно обезжиренного молока (с
массовой долей жира не более 0.05 % по ГОСТ 5867—90). нагревают на водяной бане до температуры
(35—40) °С и осаждают казеин, прибавляя по каплям раствор соляной кислоты, приготовленный по 7.1.1.
Осадку дают отстояться, сыворотку осторожно сливают. Осадок промывают,добавляя 50 см3дистиллиро
ванной воды, перемешивают, дают отстояться и сливают воду. Промывку проводят не менее пяти раз.
К отмытому осадку добавляют 30 см3ацетона и оставляют на 30 мин, затем ацетон осторожно
сливают. Действие повторяют до полного удаления жира, но не менее пяти раз. Осадок фильтруют через
сухой складчатый фильтр и переносят в коническую колбу вместимостью 250 см3,заливают 120 см3диэти-
лового эфира и закрывают притертой пробкой. Перемешивают не менее 5 мин и оставляют на 12ч вхоло
дильнике. Через 12 ч осадок фильтруют через сухой складчатый фильтр и подсушивают на воздухе
в вытяжном шкафу не менее 1часа.
(10,0 ± 0.1) г подсушенной пробы переносят в коническую колбу вместимостью 100 см3,добавляют
60 см3раствора карбамида, приготовленного по 7.1.2, перемешивают на магнитной мешалке при темпера
туре (50 ± 5) °С до полного растворения белка. Получившийся раствор переносят в мешочекдля диализа,
изготовленный из целлофановой пленки, который погружают вдистиллированную воду и помещают в холо
дильник. Диализ (освобождение раствора от низкомолекулярных соединений) проводят не менее 24 ч
при периодической сменедистиллированной воды. После чего образовавшийся осадок фильтруют через
сухой складчатый фильтр и высушивают в эксикаторе над безводным хлористым кальцием не менее 4
часов.
Срокхранения выделенного казеина при температуре (4 ± 2) SC — не более 2-х недель.
Сыворотку, оставшуюся после выделения казеина, сливают в коническую колбу вместимостью250 см3
и добавляют аммоний сернокислый (на 25 см3сыворотки (17.5 ± 0,1) г аммония сернокислого), и тщательно
перемешивают до полного растворения. Помещают в холодильник при температуре (4 ± 2) еС на 12 ч.
Отделившийся белок фильтруют через сухой складчатый фильтр и переносят в мешочек для диализа,
изготовленный из целлофановой пленки, который погружают вдистиллированную воду и помещают в холо
дильник. Диализ проводят не менее 24 ч при периодической смене дистиллированной воды. Через 24
ч
5