ГОСТ Р 53360—2009
5.3.5 Построение градуировочного графика
В семь пробироквместимостью 10см3вносят по2.0 см3рабочих стандартных растворовфосфор
нокислогокалияразличных молярныхконцентрацийвсоответствиистабл. 2. добавляютпо4.0см3вана
диево-молибденового реактива по5.3.2 и4,0 см3дистиллированной воды, тщательно перемешивают.
Одновременноготовят контрольнуюпробу на реактивы, для чегов пробиркувносят2.0 см3ацетат
ногобуферного раствора по 5.3.1.4,0 см3 ванадиево-молибденового реактива по 5.3.2 и4.0 см3дистил
лированной воды, тщательно перемешивают.
Все пробы выдерживают 10 мин при комнатной температуре и измеряютоптические плотности на
фотоэлектроколориметре при длине волны от 400 до 415 им в кювете с толщиной поглощающего свет
слоя 10 мм, против контроля на реактивы.
По полученным значениям строят градуировочный график, для чего по оси ординат откладывают
величины оптическойплотности в единицахОП, а пооси абсцисс — молярной концентрации фосфатов в
мкмоль/см3.
Рабочая зона градуировочного графика лежит в пределах от 0,20 до 0.60 единиц оптической плот
ности.
Для построения каждойточки градуировочного графикавычисляютсреднеарифметическое значе
ние оптической плотноститрех параллельных измерений.
Градуировочный график строятдля каждой новой партии реактивов, а также при замене прибора.
5.4 Подготовка пробы
5.4.1 Отбор проб проводят по4.4.1.
5.4.2 Приготовлениеосновного раствора анализируемогообразца проводят по 4.4.2.
5.4.3 Приготовление рабочего раствора анализируемого образца проводят путем разведения
основного раствора по 5.4.2 в бидистиллированной воде (например в пять раз).
5.5 Проведение анализа
5.5.1 В три пробирки (две опытные и одну контрольную) вносят по2,0 см3рабочего раствора ана
лизируемого образца по 5.4.3. Пробирки помещают в ультратермостат или водяную баню с температу
рой (37 ± 1) °С ивыдерживают втечение 5 мин.
5.5.2 В две опытные пробирки добавляют по4,0 см3раствора субстрата фитата натрия по 5.3.3,
предварительно выдержанногов ультратермостате или водяной бане стемпературой (37 * 1)*С в тече
ние 5 мин. иперемешивают. Все три пробирки помещают вультратермостат или водяную баню с темпе
ратурой (3711) ®С на 15 мин.
5.5.3 Вконтрольнуюпробиркувносят 4 см3раствора субстратафитата натрия по5.3.3. В контроль
ную и две опытные пробирки добавляют по 4.0 см3ванадиево-молибденового реактива по 5.3.2 и тща
тельно перемешивают.
5.5.4 Пробирки(двеопытные иоднуконтрольную)выдерживают 10 мин при комнатнойтемперату
ре. Растворы колориметрируют при длине волны от 400до 415 нм. в кюветес толщиной поглощающего
светслоя 10мм.противконтролянареактивы. При необходимости(опалесценция, взвесьит.д.) раство
ры центрифугируют при 7000 мин1.
6 Обработка результатов
6.1 Молярную концентрацию фосфатов(мкмоль/см3) вопытных иконтрольныхрастворахопреде
ляют поградуировочному графику.
6.2 Ферментативную активность фитаэы ФА. ед/г. в анализируемом образце рассчитывают по
формуле
ФА = ((Г°.:С>.>,(1)
ct
где Со — молярная концентрация фосфатов в опытной пробе в соответствии с градуировочным графи
ком, мкмоль/см3;
— молярная концентрацияфосфатоввконтрольнойпробев соответствиисградуировочным гра
фиком. мкмоль/см3;
t
— продолжительность гидролиза, мин;
с — массовая концентрация ферментного препарата, содержащаяся в реакционной смеси, г/см3,
рассчитываемая поформуле
7