ГОСТ Р 53360—2009
Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководство
ваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а
котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины ссоответствующими определениями:
3.1 гидролиз: Расщепление исходного соединения надва более простых в присутствии молекул
воды.
3.2 ферментативный гидролиз: Гидролиз высокомолекулярных соединений под воздействием
катализаторов белковой природы — гидролитических ферментов (гидролаз, класс3(1]).
3.3 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействуетданныйфермент.
4 Метод определения ферментативной активности фитазы
с образованием молибденовой сини
4.1 Характеристика метода
4.1.1 Метод основан на количественном определении содержания неорганических фосфатов
(Р04),образующихся в результатедействияферментафитазы насубстрат — фитат натрия (натриевую
соль фитиновой кислоты) при определенных стандартных условиях, путем их связывания молибдатом
натрия и восстановлением двухлористым оловом с образованном окрашенного в синий цвет комплек са
— молибденовой сини.
Метод используется при возникновении разногласий в качестве арбитражного.
4.1.2 За единицуфитазной активности (1 ед. ФА) принимают количествофермента, катализирую
щеегидролизфитата натрия собразованием 1мкмоля неорганического фосфата за однуминутувстан
дартных условиях (температура 37 °С. значение pH 5.5. продолжительность гидролиза 15 мин).
4.1.3 Интенсивностьокраски измеряют фотоколориметрическим методом при длине волныот650
до 700 нм.
4.1.4 Количествовыделенныхнеорганическихфосфатов определяютпоградуировочномуграфи
ку. построенномукакфункцияоптическойплотностиот молярной концентрациифосфатов, мкмоль/см3.
Методпозволяетопределятьот 0,05до0.40 мкмоль/см3фосфатов. Диапазонизмеренийконтроли
руемого показателя 500—8000 ед. ФА.
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
4.2.1Для определения ферментативной активности фитазы используют следующие средства
измерений иоборудование:
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) любого типа, которыйобеспечиваетизмерения при длине волны
от 650 до 700 нм, с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1 % (не более 0,01
единицы оптической плотности);
- pH-метр с набором электродов для измерения в диапазоне от 0до 14 pH. с пределом допускае
мой погрешности вэксплуатации±0.1 pH;
- магнитную мешалкулюбой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин-’;
- ультратермостат или водянойтермостат сточностью регулированиятемпературы ± 1вС,
- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее
7000 мин-1;
- весы лабораторные по ГОСТ24104. высокогокласса точности, снаибольшим пределом взвеши
вания 200 г. ценой поверочного деления 0,1 мг и пределом допускаемой погрешности в эксплуатации
±0.15 мг; с наибольшим пределом взвешивания 1 кг. ценой поверочного деления 20 мг и пределом
допускаемой погрешности в эксплуатации * 30 мг,
- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100 ± 1) °С;
- таймер любого типа с погрешностью ♦30 с:
- шкаф сушильный, обеспечивающий температуру нагрева (120 ±5) °С,
- вытяжной шкаф любого типа;
- механическую мельницу, обеспечивающую размалывание исследуемого образца ферментного
препаратадо полного прохода пробы черезсито;
- сито с размером отверстий 1.0 мм. сделанное из металлического проволочного тканого мате
риала.
2