ГОСТ Р 53360—2009
5.1.4Количество выделенныхнеорганическихфосфатов определяютпоградуировочномуграфи
ку, построенномукакфункцияоптическойплотностиотмолярной концентрациифосфатов, мкмоль/см3.
Метод позволяет определять 0.5—2.0 мкмоль/см3фосфатов. Диапазон измерений контролируе
мого показателя 500—8000 ед. ФА.
5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
5.2.1 Для определения ферментативной активности фитазы с образованием фосфорнованадие-
во-молибдонового комплекса применяют средства измерений, вспомогательное оборудование, кото
рые указаны в 4.2.1 и4.2.2.
5.2.2 Для определения ферментативной активности фитазы используют реактивы по 4.2.3, а
также:
- аммоний молибденовокислый по ГОСТ 3765;
- аммиак водныйособой чистоты по ГОСТ 24147. раствор массовойдоли 25 %;
- кислоту азотную по ГОСТ4461, раствор массовойдоли 25 %;
* аммония метаванадат по ГОСТ9336;
- водудистиллированную по ГОСТ6709.
5.3 Подготовка канализу
5.3.1 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0.1 моль/дм3 с
pH 5.5 проводят по4.3.1.
5.3.2 Приготовление ванадиево-молибденового реактива
В колбу вместимостью 2дм3помещают0.6 г аммония метаванадата ирастворяют в440,0см3горя
чейдистиллированной воды. Растворохлаждаютдо комнатной температуры ипри постоянном переме
шивании добавляют 560.0 см325 % раствора азотной кислоты и 25,0 гаммония молибденовокислого.
Перемешиваютдо полного растворения.
Срок хранения при комнатной температуре — один год.
5.3.3 Приготовление раствора субстрата фитата натрия молярной концентрации 5 мкмоль/см3
проводят по4.3.4.
Раствор готовят в день проведения анализа.
5.3.4 Приготовление рабочих стандартных растворов фосфатов (Р04) для построения
градуировочного графика
5.3.4.1 Приготовлениеосновного стандартного раствора фосфатов проводят по4.3.5.1.
Молярная концентрация фосфатов в стандартном растворе составляет5 мкмоль/см3.
Срок хранения при комнатной температуре — не более 1мес.
5.3.4.2 Приготовлениесерии разведений — рабочих стандартных растворов фосфатов
Изосновного стандартногораствора фосфорнокислого калияпо4.3.5.1 готовятсерию разведений
в соответствии с таблицей2.
Т а б л и ц а 2
Объем стандартного раствора
фосфорнокислого калия молярной
концентрации 5 мкмоль/см3. см5
Объем ацетатного буферного раствора.
см3
Молярная концентрация фосфатов
в растворе, мкмолы’см3
1.0
9.0
0.50
1.5
8.5
0.75
2.0
8.0
1.00
2.5
Т.5
1.25
3.0
Т.0
1.50
3.5
6.5
1.75
4.0
6.0
2.00
Рабочие стандартные растворы фосфатов готовят в день построения градуировочного графика,
при этом берут по три параллельных разведения для приготовления каждой молярной концентрации
фосфатов.
6