ГОСТ Р 52840— 2007
Т а б л и ц а 4 — Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора азотнокислого
серебра
Номер
этапа
Наименование раствора
Время, мин
Температура, ’С
1
Фиксирующий
5.0
20
2
Промывной
2.0
50
3
Промывной
4.0
50
4
Усиливающий окраску
6.0
50
5
Промывной
3.0
50
6
Промывной
5.0
50
7
Дистиллированная вода
2.0
50
8
Дистиллированная вода
2.0
50
9
Окрашивающий
10.0
40
10
Дистиллированная вода
0.5
30
11
Дистиллированная вода
0.5
30
12
Развивающий окраску
0.5
30
13
Развивающий окраску
0.5
30
14
Останавливающий окраску
2.0
30
15
Консервирующий
5.0
50
Растворы используют только один раз (за исключением фиксирующего раствора), не применяя
циркуляцию. Приготовленные растворы, за исключением проявителя, стабильны 2— 3сут при температуре
от 20 °С до 25 °С.
Окрашивание и обесцвечивание занимают от 30 до 35 мин. После консервирования полиакриламид
ные гели вынимают из системы и высушивают при температуре от 20 аС до 25
°С
в течение 4 ч.
9 Обработка результатов анализа
9.1 Полученную картину распределения белковых полосанализируемой пробы сравнивают с карти
ной распределения белковых полос референс-обраэца.
9.2 Строят графическую зависимость значений изоэлектрических точек стандартных белков от рас
стояния каждой белковой полосы до катода (см. приложение А.2).
9.3 Измеряют расстояние от катода до локализации белковых полос исследуемого образца и рефе
ренс-обраэца и с помощью калибровочного графика, построенного по 9.2, находят соответствующие значе
ния изоэлектрических точек белков.
Графическое построение и определение изоэлектрических точек может осуществляться с помощью
компьютерной программы после переноса изображения распределения белковых полосе полиакриламид
ного геля на монитор компьютера с использованием систем вцдеодокументирования.
9.4 Совпадение картин распределения белковых полоси совпадение значений изоэлектрических то
чек маркерных белков анализируемого и референс-образцов свидетельствует об их идентичности и под
тверждает правильность наименования анализируемого образца. Пример результата анализа и его компь
ютерной обработки для разных видов исследуемых объектов приведен в приложении А.
9.5 Для подтверждения результатов идентификации проводят параллельное разделение белковых
полос как из одной пробы, так и из разных проб, полученных из двух — трех образцов анализируемого
объекта.
9.6 Результаты анализа оформляют в виде протокола. Образцы протоколов приведены в прило
жении Б.
6