ГОСТ Р 52840-2007
7.1.4 Консервирующий раствор: в колбу вместимостью 1000 см3вносят 40 см3глицерина, добавляют
920 см3дистиллированной воды и 40 см3уксусной ледяной кислоты.
7.1.5 Промывной раствор готовят в количестве не менее 400 см3, фиксирующий, окрашивающий и
консервирующий растворы — не менее 80 см3.
7.2 Растворы для обработки гелей при окрашивании серебром
7.2.1 Фиксирующий раствор: в колбу вместимостью 500 см3помещают (100.00 ± 0.01) г трихлорук-
сусной кислоты и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор используют 3 -4 раза.
7.2.2 Промывной раствор: в колбу вместимостью 1000 см3вносят 100 см396 %-ного этилового спир
та. добавляют 850 см3дистиллированной воды и 50 см3ледяной уксусной кислоты.
7.2.3 Раствор, усиливающий окраску (сенсибилизатор): в колбе вместимостью 100 см3смешивают
30 см325 %-ного глутарового альдегида и 60 см3дистиллированной воды.
7.2.4 Окрашивающий раствор: в колбу вместимостью 100 см3вносят (0.150 ± 0.001) г азотнокислого
серебра и доводят объем дистиллированной водой до метки.
7.2.5 Раствор, развивающий окраску (проявитель): в колбу вместимостью 1000 см3вносят 200 см3
12.5 %-ного раствора углекислого натрия. 800 см3дистиллированной воды и 400 мкл 37 %-ного формаль
дегида.
7.2.6 Раствор, останавливающий окраску: в колбу вместимостью 100 см3вносят (1.60 ±0.01) г тио
сульфата натрия и (3.70 ± 0.01) г трис HCI и доводят объем дистиллированной водой до метки.
7.2.7 Консервирующий раствор: в колбу вместимостью 100 см3вносят 10 см3глицерина и доводят
объем дистиллированной водойдо метки.
7.2.8 Промывной раствор готовят в количестве не менее 400 см3. Фиксирующий, окрашивающий,
проявляющий растворы и растворы, усиливающий окраску и останавливающий окраску, готовят в количе
стве не менее 80 см3. Количество дистиллированной воды — не менее 400 см3.
8 Проведение анализа
8.1 Приготовление проб для анализа
8.1.1 Мышечную ткань исследуемого образца и референс-образца освобождают от крови, темных
мышц. Навеску массой (5.0 ± 0.1) г светлой мышечной ткани рыбы-сырца, филе или сырого фарша измель
чают в течение 30 с в ступке с 5 см3дистиллированной воды.
8.1.2 Смесь, полученную по 8.1.1. переносят в центрифужные пробирки вместимостью 50 см3и цен
трифугируют при температуре 4 DC в рефрижераторной центрифуге при частоте вращения 4000 мин-1в
течение 15 мин.
8.1.3 Надосадочную жидкость, полученную по 8.1.2. переносят в центрифужные пробирки вместимо
стью 10 см3и центрифугируют при температуре 4 °С в рефрижераторной центрифуге причастоте вращения
12000 мим-’ втечение 15 мин.
8.1.4 Надосадочную жидкость, полученную по 8.1.3. фильтруют через бумажный фильтр в колбу.
Полученный прозрачный раствор используютдля проведения ИЭФ.
8.2 Приготовление раствора стандартных образцов
Готовят раствор стандартных калибровочных белков вдистиллированной воде в зависимости отдиа
пазона pH. выбранногодля анализа: в 30 — 40 мкл дистиллированной воды для окрашивания кумасси и в 2
см дистиллированной воды для окрашивания серебром.
8.3 Проведение изоэлектрофокусирования на приборе
8.3.1 Включают систему.
8.3.2 Помещают полиакриламидный гель в систему в соответствии с инструкцией, прилагаемой к ней.
8.3.3 Формируют лунки в парафиновой пленке с помощью штампа: штамп с лунками, обращенными
вверх, кладут на стол; накрывают парафиновой пленкой защитным покрытием вверх (по направлению ли
ний отверстий); в парафиновой пленке, двигаясь вдоль линии лунок, делают углубления при помощи стек
лянной палочки, а затем снимают защитный слой.
8.3.4 Растворы, полученные по 8.1.4 из анализируемого образца и референс-образца. а также ра створ
стандартного набора калибровочных белков с известной изоэлектрической точкой, выбранный взави
симости от заложенного в программе диапазона pH. вносят микродозатором в лунку в количестве 1,5 мкл.
8.3.5 Аппликатор опускают на поверхность растворов исследуемого образца, референс-образца и
стандартного набора калибровочных белков, помещенных влунки, сформированные в парафиновой плен
ке с помощью штампа no 8.3.3. нарушая поверхность капельдля заполнения капилляров.
4