ГОСТ Р 53162—2008
В случае использования колонки, указанной в 5.9.3, подходящими являются следующие пара
метры:
- скорость потока подвижнойфазы (колонка): 1.0 см3/мин;
- скорость потока лослеколоночного реагента: 0,3 см*/мин;
- впрыскиваемый объем: 50 мкл.
Дают всей системе функционировать 10 — 20 мин для ее стабилизации. Если используется интег
ратор. настраиваютрегулировкучувствительностифлуоресцентногодетектора или интегратора, чтобы
получить соответствующий сигнал: шум 5:1 для 0,125 нг афлатоксина G2в 50 мкл. Если используется
регистрирующий прибор с ленточнойдиаграммой, настраиваютрегулировкуфлуоресцентногодетекто
ратакимобразом, чтобы получитьдля0.125нгафлатоксинаG2в50мклот30 %до40 %шкалырегистри
рующего прибора.
6.5 Идентификация
Проводят идентификацию каждогопика афлатоксина на хроматограммеобразца путемсравнения
значений времениудерживания со значениями соответствующихстандартов.
Афлатоксины можно идентифицировать одновременным вводом раствора испытуемой пробы и
градуировочных растворов. Кроме того, при идентификации помогает исчезновение ликов афлатокси-
нов В, и G, вслучав, когда не проводитсядобавка реагентадля дериватизации.
6.6 Построение градуировочной зависимости
Для каждого афлатоксина строят градуировочную зависимость путем ввода 50 мкл стандартных
растворов 1,2,3 и4 (см. таблицу2). Проверяютлинейность зависимости (см. [3]).
6.7 Определение
Количественное определение проводится методом внешнего стандарта с интегрированием пло
щади пика или измерением высоты пика, которыедалее соотносятся с соответствующими значениями
для стандарта.
В петлю инжектора вводят 50 мкл стандартного раствора в соответствии с инструкциями произво
дителя инжектора. Афлатоксины элюируютв порядке G2.G,.В2иВ, свременем удерживанияприблизи
тельно 6, 8, 9 и 11 мин соответственно. Пики должны быть разделены до базовой линии. При
необходимости регулируют значения времени удерживания путем изменения концентрации метанола
подвижной фазы (4.11).
Вводят 50 мкл (У6)очищенного экстракта образца (см. 6.3)в инжекторную петлю.
7 Обработка результатов
Рассчитываютмассут,,г.анализируемойпробы, присутствующей во фракции второгофильтрата,
взятогодля IA колонки (Ух). поформуле
т, = т о V*,<2>
v3
где т0— масса пробы образца (см. 6.2). г(т0= 25 г);
У, — общий объем первого фильтрата (см. 6.2), см3(V, = 125 смл);*
V2 — объем фракции первого фильтрата (см. 6.2), взятый для разбавления.
cm
3(V2
= 15 см3);
V3 — общий объем второго фильтрата (см. 6.2), см3(V3= 45 см3);
V4— объем фракции второгофильтрата (см. 6.3), см3(Vt = 15 см3).
Рассчитывают массовую долю каждого афлатоксина tv,, в микрограммах на килограмм пробы,
вычисляют поформуле (метод внешнего стандарта)
и /----------,• •
Vt т,
где Vb — объем элюата (6.3), мкл (V5= 2000 мкл);
Ve — объем очищенного ивведенного экстракта образца (6.7), мкл (V6= 50 мкл);
т ( — масса данного афлатоксина, присутствующего в введенном объеме, соответствующая изме
ренной площади пика или высоте пика, определяемая по градуировочной характеристике, в
нанограммах;
т, — масса анализируемой пробы, г.соответствующей фракции второго фильтрата, взятогодля IA
колонки (V4) [см. формулу (2)].
Для получения массовойдоли суммы афлатоксиновсуммируют массовыедоли четырехафлаток-
синов.
* Принимая во внимание данные по точности метода. У, может рассматриваться как эквивалент объема
растворителя экстракции.
6