ГОСТ Р 53162—2008
- размер сферических частиц: 5 мкм.
Допускается использование колонки меньшейдлины.
5.9.4Система послеколоночнойдериватизации. состоящая из безпульсационного насоса итрой
ника. имеющего очень малый мертвый объем, системы труб из политетрафторэтилена или нержавею
щей стали длиной от 3000 до 5000 мм и внутренним диаметром 0.5 мм. а также водяной бани или
послеколоночного реактора для реакции с участием йода.
5.10Флуоресцентный детектор, пригодный для работы при длине волны возбуждения 365 нм и
излучении при длине волны эмиссии435 нм (дляфильтровых приборовдлина волны регистрации излу чения
>400 нм), спределомдетектированияне более0.05нгафлатоксина В, вобъеме ввода(вданном случае он
равен 50 мкл).
6 Методика испытания
6.1 Общие замечания
Растворы проб и стандартные растворы для определения с помощью ВЭЖХ должны содержать
одинаковый растворитель илисмесь растворителей.
6.2 Экстракция
Взвешивают25 г гомогенизированной пробы, сточностью 0.1 г в сосуде блендера (см. 5.2). Добав
ляют 5 г хлорида натрия (см. 4.2) и 125 Cbt3 растворителя для экстракции (см. 4.10) и гомогенизируют с
помощью перемешивающего устройства в течение 2 мин при высокой скорости. Контролируют, чтобы
время и скорость перемешивания не оказывали негативного влияния на эффективность экстракции.
Смесь фильтруютчерез рифленую фильтровальную бумагу (см. 5.3) (V,).
Отбираютпипеткой 15см3(V2)фильтрата в коническую колбуподходящего размера состеклянной
пробкой. Добавляют 30 см3 воды, закрывают колбу пробкой и перемешивают. Перед проведением
аффинной колоночной хроматографии разбавленный экстракт фильтруют через фильтровальную
бумагуизстеклянного микроволокна (5.4). Фильтрат(V3) должен бытьпрозрачным. Если это нетак. про
водят повторную фильтрацию. Незамедлительно следуют процедурам в соответствии с 6.3.
Для получения прозрачногораствора можно также использовать центрифугу.
6.3 Очистка
Готовят IA колонку (см. 5.1) иосуществляютпроцедуруочистки всоответствиисинструкциями про
изводителя. Отбираютпипеткой 15
cm
3(Va)второгофильтрата (\/3)в емкостьдля растворителя IAколон
ки. Пропускают его через разделяющую колонку, затем промывают колонку, как это описано в
инструкциях производителя, и удаляют элюаты. Начинают проводить элюирование афлатоксинов.
Собираютэтанольныйили ацетонитрильныйэлюат(взависимостиотпродуктаили инструкцийпроизво
дителя) в мернойколбевместимостью 2см3(см. 5.5)(или другого объема, установленного производите
лем). Разбавляютдо метки водой (V5). Перемешивают идействуют в соответствии с 6.4.
Методы вводав IA колонки, промыванияиэлюированиянемногоотличаются, взависимостиот про
изводителяколонки, и необходимочеткоследоватьконкретным инструкциям, прилагаемымкколонкам.
П р и м е ч а н и е — В целом, процедуры включают экстракцию образца смесью метанола и воды, фильтра
цию или центрифугирование, возможное разбавление образца раствором фосфатного буфера или водой, загрузку
под давлением в предварительно промытую колонку, промывку колонки дистиллированной водой и элюирование
афлатоксинов метанолом или ацетонитрилом (в зависимости от продукта и инструкций производителя).
Допускается использоватьтрадиционные колонки с силикагелем или колонки твердофазной экст
ракции. В этих случаяхтакже необходимо четко следоватьинструкциям производителя. Если раствори
тель. применяемый для элюирования афлатоксинов. не совместим с подвижной фазой, то элюат
необходимо выпаритьдо сухого остатка в токе азота при температуре ниже 40 °С. Остаток необходимо
растворить в подвижной фазе и разбавить до 2 см3 или до того объема, который установлен
производителем.
Необходимо предусмотреть, чтобы максимальная емкость колонки не была превышена.
6.4 Условия работы при выполнении ВЭЖХ
Выход разделительной колонки подсоединяют к одномуответвлению тройника системы послеко
лоночной дериватизации (5.9.4) с помощью короткого фрагмента системы труб с внутренним диамет
ром. например. 0.25 мм. Ко второму ответвлению тройника подсоединяют выход насоса, который
поставляет реагентдля послеколоночнойдериватизации. Один конец витка труб из политетрафторэти
лена или нержавеющейстали(см. 5.9.4) присоединяют ктретьемуответвлению тройника и другой конец
присоединяют к детектору (см. 5.10). Используя термостат или водяную баню, поддерживают
температуру реакционного змеевика на уровне 70 °С.
5