ГОСТ Р 53220—2008
повторно полимеризацию в течение 20—30 мин. Для достижения лучшего разделения белковых полос
кассетус гелем можно выдержать в течение 10 ч при 4 X . Послеэтого гребенкуследуетудалить.
8.1.3 Всоответствиис инструкциейпоэксплуатации кассетузакрепляютв электрофорезной каме
ре, тудаже помещают электроды, спиральдля охлаждениябуфера изаливаютвэлектродную камерудо
краевэлектродный буфертак. чтобы буферный раствор покрывал верхний край кассеты с гелем.
После этого в каждое углубление микрошприцем вносят предварительно подготовленные по 7.2
растворы белковых проб в количестве 1—2 мкл, содержащихбелокиз расчета 10—20 мкг наодноуглуб
ление. Допускается максимально вноситьводноуглубление20 мкл раствора белка. Введениепробосу
ществляют медленно, так. чтобы вводимый растворбелка не всплывал содна углублений.
В отдельноеуглублениерядомсанализируемойпробойвносят5мкл растворамаркерныхбелковс
массовой концентрацией белка 1мкг/мкл, приготовленного по 7.1.8.
Включаютэлектрическийтокипроводятпроцесс приплотности постоянноготока 2,5мА/см2втече
ние 1—2 ч.
Времяпроцесса зависитот состояниягеля(насколькосвежимибыли использованныерастворы), а
также от расстояния, на которое необходимо продвинуть белки.
8.1.4 В ходе электрофореза окрашенные в фиолетовый цвет полосы белков собираются на дне
углублений верхнего геля, затемпродвигаются вниз. Происходитформированиемолекул белка подвоз
действием тока (движение) и распрямление белковых глобул в присутствии СДС — реактива, способ
ствующего разворачиванию молекул белка (добавление 1,5 г СДС на 1 г белка вызывает его полную
денатурацию).
При закислении раствора окраска полос может измениться на желтую из-за наличия красителя
бромфенолового синего.
После прохождения белковчерезверхнийгельполосы собираютсяна границедвухгелей, входятв
нижний сепарирующий гель, и происходит разделение белка на его составные части (фракции).
Путь, который проходит каждая полоса R,. прямо пропорционален молекулярной массе белковой
фракции.
8.1.5 Процесс завершен, когда нижние низкомолекулярные белковые фракции оказываются при
мерно в 2 см от нижнего края геля. Камеру отключаютот источника тока иэлектродный буфер сливают.
Камеру разбирают и извлекают гель на поверхность стекла. Отделенный гель помещают в 12.5%-ный
раствортрихлорухсуснойкислоты, выдерживают 15мин. сливаюткислотуи промываютдистиллирован
ной водой. Гельпереносят вокрашивающийраствор ивыдерживают прикомнатнойтемпературе втече
ние 30 мин.
Затем опять промывают дистиллированной водой 2 раза. Обесцвечивание геля проводят в обес
цвечивающем растворе втечение 3 ч.
В результате получают полиакриламидный гель, в котором видны окрашенные в синий цвет поло
сы фракций анализируемого белка и полосы, соответствующие маркерным белкам сизвестной молеку
лярной массой. Сравнение белковых полос анализируемого образца с полосами маркерных белков
позволяет сделать заключение о фракционном составе определяемого белка и молекулярной массе
каждой фракции, а также выявить характеристические полосы белка, соответствующие примесям рас
тительного происхождения.
8.1.6 Повторяютанализ со второй параллельной пробой.
8.2 Определение массовойдоли соевых белков
8.2.1 По градуировочному графику определяют массовую долю соевых белков в анализируемой
пробе.
9 Обработка результатов
9.1 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение двух
параллельныхопределений, если выполняется условие приемлемости:
((2■|С, - С2|У(С, + С2)] 100 £л>тм,(1)
гдеС,иС2 — результатыпараллельныхопределений массовойдоли соевых белков, определенные по
градуировочному графику. %:
готи — предел повторяемости, приведенный в таблице 1.
Результат вычисленийокругляютдо целого числа.
6