ГОСТ Р 53220—2008
7.2 Проведение экстракции
Навескуобразца. содержащегооколо0.2 г общегобелка, определенногопредварительнометодом
Кьельдаля по ГОСТ25011 (для мясных продуктов при массовой долеобщего белка 18 % масса навески
составляет 1.0 г), гомогенизируют в микроизмельчителе или путем растирания в ступке с 10
см3 ТРИС-буфера pH 6.8 или буфера для растворения белковых проб (в случае плохой
растворимости). Затем нагревают смесь до 75 °С и выдерживают при этой температуре 30 мин. Смесь
центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Прозрачную надосадочную жидкость используют
для проведения электрофореза.
7.3 Приготовление смесей для градуировочного графика
Навески по 100,0 гсвинины (говядины или баранины, содержание животного белка не менее 18%)
смешиваютснавесками 1.5.10.15.20.50 и85 гсоевогоизолята. содержащего не менее85 % раститель
ного белка.
Точное содержание растительного и животного белка предварительно устанавливают методом
Кьельдаля по ГОСТ 25011. Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30
миндо образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае
приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорасти
тельные смеси, массовая доля растительного соевого белка в которых относительно массовой доли
общего белка равна соответственно4.5 %; 19,1 %: 32,1 %: 41.5 %. 48.6 %; 70.2 % и 80,0 %.
7.4 Построение градуировочного графика
7.4.1Проводятденситометрированиевыявленных характеристическихбелковыхполос, соответ
ствующих молекулярным массам 65000—75000, иавтоматически, используя показанияденситометра,
вычисляют сумму площадей пиков, соответствующих белковым зонам с молекулярными массами
65000—75000.
Сумма площадей пиков, соответствующих белковым зонам с молекулярными массами
65000—75000. пропорциональна содержанию соевой добавки в мясе и мясных продуктах.
Градуировочный графикстроятпорезультатам определениямассовойдолисоевыхбелковвдвух
компонентныхмодельныхмясорастительныхсмесях, приведенным в таблице 2.
График, построенный поданным таблицы 2. представлен в приложенииА.
Т а б л и ц а 2
Сумма площадей пиков на электрофо-
реграмме в области молекулярных масс
65000—75000. уел. ед.
0.12675
100145175
190225255290
Массовая доля соевых белков в анали
зируемом образце.
X
01020
304050
60708090
8Проведение исследования
8.1 Проведение электрофореза
8.1.1 Всоответствии с инструкцией поэксплуатациисобираюткамерудля проведения вертикаль
ногоэлектрофореза.
8.1.2 Подготовка кассеты и заполнение ее нижним сепарирующим (рабочим) и верхним
формирующим гелем
Два чистых стекла, входящих в комплект камеры для электрофореза, обезжиривают этиловым
спиртом. Затем их закрепляют в кассету с заданным расстоянием между стеклами 1 мм. образуя про
странстводлязаливкигеляразмером 115х 115х 1 мм. Затемосторожнопокраюстеклачерез наконечник
от пипеточного дозатора заливают состав для нижнего сепарирующего геля на три четверти высоты
стекла. В кассету постенке наповерхностьзалитого геля приливаютдистиллированную водудля поли
меризации геля и выравнивания верхнего края его поверхности. После полимеризации граница между
гелем иводойдолжна бытьчетко видна. Процесспроисходитпритемпературе20 °Свтечение 1 ч. Увели
чение времени полимеризации приводиткполучению болееплотнойсеткигеля ивозрастанию времени,
необходимогодля проведения электрофореза.
После полимеризации водусливаютисверху через пластиковый наконечникот пипеточного доза
тора заливают формирующий гель. Гель заливаютв кассету на поверхность ранее полученного гелядо
верхних краев стеклянных пластинок, вставляют в раствор специальную пластмассовую гребенку для
формирования в геле углублений, в которые будут вноситься анализируемые образцы, и проводят
5